verzeichnisse - ArchiMeD - Johannes Gutenberg-Universität Mainz

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6 Diskussion
La/SS-B-Proteinmengen auf die Translationseffizienz der cDNA-Isoformen zurückzuführen
waren. Durch eine densitometrische Bestimmung konnte gezeigt werden, dass alle in vitro
transkribierten/translatierten alternativen cDNA-Isoformen mit gleicher Effizienz exprimiert
wurden (Abb. 12). Im Gegensatz dazu konnte von GRÖLZ (1998) für die humanen
La/SS-B-cDNA-Isoformen gezeigt werden, dass die Translationseffizienz der alternativen
cDNA-Isoformen geringer war, als die der klassischen.
Neben den murinen La/SS-B-Banden mit einem MW von etwa 45 kDa konnten auch
einige schwächere Banden detektiert werden (Abb. 11). Diese Banden waren nur in den
Laufspuren zu erkennen, in denen die Translationsprodukte der alternativen cDNA-Konstrukte
des La/SS-B aufgetragen wurden. Somit konnten unspezifische Transkriptionen und
Translationen von Anteilen des Vektors pcDNA3 ausgeschlossen werden. Auch konnten diese
Banden keine Proteine aus dem Reticulozyten-Extrakt darstellen, da diese offensichtlich alle
durch die Immundepletion mit dem für das La/SS-B-spezifische mAK 5B9 entfernt wurden.
Demzufolge musste es sich bei diesen Banden ebenfalls um La/SS-B-Banden handeln. Bei den
Banden mit ungefähr 43 und 28 kDa handelte es sich entweder um Degradationsprodukte des
La/SS-B-Proteins, oder um ein N-terminal verkürztes La/SS-B-Protein, das durch interne
Initiation entstanden sein musste (SCHÖRNER und DRATHEN, 2000; unveröffentlicht).
In vitro-Translationssysteme mit Reticulozyten-Lysat neigten zur Artefaktbildung;
mitunter kam es zur Entstehung von aberranten Translationprodukten. Diese
Translationsprodukte entstanden vermutlich durch Initiation der Translation von einem intern
gelegenen Methionin anstelle des korrekten Start-AUGs (SVITKIN et al., 1994). Die Banden mit
einer Größe von etwa 43 und 28 kDa könnten solchen aberranten Translationsprodukten
entsprechen. Die Banden mit einem MW von ca. 60 kDa könnten La/SS-B-Proteine darstellen,
die mit verkürzten La/SS-B-Fragmenten assoziiert waren (BACHMANN, 2000; unveröffentlicht).
Da die Nebenbanden jeweils gleich intensiv gefärbt waren, musste die
in vitro-Translation und die Immundepletion bei allen Ansätzen mit einer vergleichbaren
Effizienz abgelaufen sein. Darum war es auch zulässig, die Intensität der La/SS-B-Banden
direkt miteinander zu vergleichen (Abb. 11).
6.16 Der Translationsmechanismus der mRNAs
Das scanning-Modell der Translation von eukaryontischen mRNAs (KOZAK, 1978)
postulierte, dass die 40S-Ribosomenuntereinheit zusammen mit verschiedenen
Translations-Initiationsfaktoren am 5’-Ende einer mRNA an die 7-Methylguanosinium-Kappe
(m 7 Gppp-Kappe) band und über die 5´-UTR bis zu einem ersten Start-AUG mit einer für die
Initiation der Translation vorteilhaften Umgebungssequenz (Kozak-Sequenz) (KOZAK, 1989;
KOZAK, 1987) wanderte. Durch einen Vergleich von 699 Vertebraten-mRNAs wurde von
KOZAK (1987) die Konsensussequenz GCCGCC A / G CCAUGG für die Initiation der Translation