verzeichnisse - ArchiMeD - Johannes Gutenberg-Universität Mainz

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1 Einleitung
Immuno-Blot denaturiert wird, ist die Detektion des La/SS-B-Proteins mit dem mAK 4B6 hier
meist nicht möglich (SEMSEI et al., 1993).
Der mAK SW5 erkennt ein Epitop im RNP-80-Motiv und reagiert mit La/SS-B-Protein
aus Mensch, Affen und Rind, nicht aber mit dem aus Maus und Ratte (PRUIJN et al., 1995).
Das Epitop des mAK 5B9 (DRATHEN, 1997) liegt in der N-terminalen Domäne
(SCHÖRNER, 2000; unveröffentlicht; DRATHEN, 1997). Dabei muss ein konserviertes Epitop
erkannt werden, da La/SS-B-Protein aus Mensch, Maus, Ratte, Affe, Hamster (DRATHEN,
1997), Kaninchen und Katze (SCHÖRNER, 2000; unveröffentlicht) detektiert wird.
1.5.9 Die hot spot-Region und das putative Neoepitop
Bei der Untersuchung einer cDNA-Bank aus PBLs einer autoimmunen pSS-Patientin
wurde eine La/SS-B-cDNA mit einer Deletion eines Adenin-Nukleotids im Exon 7 gefunden
(BACHMANN et al., 1996a). Wahrscheinlich handelte es sich um eine Punktmutation, die von
der Patientin im Laufe ihres Lebens erworben wurde. Unabhängig davon fand sich in einer
cDNA-Bibliothek aus menschlichem Tumor-Lebergewebe eine La/SS-B-cDNA, die an
derselben Stelle eine Insertion eines Adenin-Nukleotids enthielt. Die Mutationen lagen in einer
Region, die als hot spot-Region charakterisiert werden konnte (GRÖLZ et al., 1997c) und die
die linker-Region zwischen dem La/SS-B-N- und La/SS-B-C-Terminus darstellte. Im humanen
La/SS-B-Gen liegt in dieser hot spot-Region eine Kassette mit acht aufeinanderfolgenden
Adeninen. Die Patienten-cDNA enthält hier sieben, die Leber-cDNA neun Adenine.
Bei der Insertionsmutation entsteht ein neues Stop-Codon gleich nach der
Punktmutation, was zur Folge hat, dass die Translation abbricht. Hierbei fehlt die C-terminale
Domäne und somit auch das NLS, so dass Transfektionsstudien erwartungsgemäß eine
überwiegend zytoplasmatische Lokalisation des verkürzten La/SS-B-Proteins ergeben
(BACHMANN et al., 1997). Auch im Fall der Deletionsmutation wird nur ein N-terminales
Fragment gebildet, dem das NLS fehlt. Jedoch weicht die AS-Sequenz unterhalb der
Rasterschubmutation von der nativen Sequenz ab, da, bedingt durch die Mutation, 12 neue AS
entstehen (BACHMANN et al., 1996b). Dann unterbricht ein Stop-Codon die weitere
Translation. Die durch die Mutationen gebildeten N-terminalen La/SS-B-Fragmente werden als
La/SS-B-N(9A) (Insertionsmutation) und La/SS-B-N(7A) (Deletionsmutation) bezeichnet.
Die 7A-Mutation in dieser kritischen Region, von der durch epitope mapping gezeigt
wurde, dass sie eines der Hauptautoepitope des humanen La/SS-B-Proteins beinhaltete, führte
zur Bildung eines 12 AS langen Neoepitops, das im Protein normalerweise nicht vorkam
(BACHMANN et al., 1996b), wodurch die Immunantwort wahrscheinlich getriggert wurde. Dies
deutet darauf hin, dass die Entstehung von ANAs zumindest teilweise durch einen
Autoantigen-getriebenen Mechanismus erfolgt (BACHMANN et al., 1996b).
Das Neoepitop ist reich an basischen AS. Es zeigt im Sequenzvergleich Homologie zu