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142 8 Anhang 4101 TGCCTCAGAGTCCTAAATGCAGAAATCACAGGCATGAACCACTACACCTGACTTCACGCTGAATTTATAAAAGCCTTAAGAATGAATGTTTGCCCCCCCT 4200 4201 CCTTTATGTTGCTTTTAACATTTCCAAGCAGTCATTCTTGGGTCTGCTACTTTTTTAGCTGAGGATTGAGCCCAACTCCTCAGTTTATTTACTTTTTCCA 4300 4301 CATTGATTTAAAAAGAAGTTTTAAAATATGTTAGATTTTCATTATATTTTTGAGACTTTATATTCTGGCAATGAACTTGTTCACTAACATTTTAGTATCC 4400 4401 TCTACTGATTTGTATTCATACATTATGGTCTATTAAGAGGAAATATTTAGGTCTTTTAAATTCTAACATTTTTAAAGTGTAAAAAAGTCATTTTCAAAAA 4500 GWK-In2-R2-nested (←) La-Murin-P3 (→) 4501 TTTCATGATTGAACTCAGTATTATACAATGCTCTTCTGAAATACATTATAATTATTCACAGTATTATTTTGGAGCTTCAATTTGCCACGAGACAAGTTTT 4600 4601 TAAAAGAACAGATCAAATTGGATGAAGGCTGGGTACCTTTGGAAACAATGATAAAATTCAACAGGTAAGTCTTTTTGGTTGGTTTGTTTCTATTTCTTGG 4700 4701 GATTAAACCTAGGAACTTGTACATGTGTTGTCATTGAATTACCTTAGTTTTGCGGCTAATAAACTAAAAAATCTTTTTAAAAGGCATCAGTTTCTGTTAC 4800 GWK-Ex4-R2- 4801 TGTTGAGAGCTACTACTAAATCTGCTTTTTACAGTGTTTTTATGTATGTACTTTTCAGGCTAAACCGGCTGACAACAGACTTTAATGTAATTGTGCAAGC 4900 -nested (←) GWK-Ex4-R1 (←) La-Murin-P4R (←) La-Murin-P4 (→) 4901 ACTGAGCAAATCTAAGGCAAAACTCATGGAAGTCAGTGCAGACAAAACTAAAATTAGAAGATCACCAAGCAGACCACTCCCTGAAGTGACGGATGAGTAT 5000 5001 AAGAATGATGTAAAAAACAGATCTGTTTATATTGTAAGTGGGTCCATGATGTATTTCATGTATTTATTATTATTAATTATTACTATTTTTGGTTTTTTGA 5100 5101 GACAGGGTTTCTCTGTATAGTCCTGGCTATCCTGGAACTCACTCTGTAGACCAGGCTGGCCTCGAACTCAGAAATCTGCCTCATATTACTTTTACTTAGA 5200 5201 AAGAAAATGCTCAGGGATCACATTTGGCCAGTTTAGCTATTGTACTTCTAAGTTCTTTATCATTGTTAATGTTACATTGTTCACATGATAAACTCTAATA 5300 5301 GCTGAATTCTATAGTAATTTTCATTAGCATATTAATTTCTAAATGCATAATGGAAAGCTTTGAAAATAAGGAAGTAGATTGAATAGTGTGAAGTACCATT 5400 5401 GTGAAACCTCAAAAGTTCTTACCATGTAAATAATGCTTTGTCTTTGCTCCACCTGAGTTATTTTGGAGCAAATCTCAGGTGAATCACCTTATTGCACTAG 5500 5501 AGAATAAGGTTGTTAAACAATTAAGAGAGGGGAGAGAAAGATACCTAGCTCTGACTTCGTTTCGAGACAAAATAAATCAGTTTATTCTGGGGAGAGTTTA 5600 La-Murin-P5R (←) La-Murin-P5 (→) 5601 CCCAGGAGTCATTATTTGTACTTCTTTTTCTACTTTTTACAGAAAGGTTTCCCAACTGACGCCACCCTTGATGATATAAAAGAATGGCTAGACGATAAAG 5700 5701 GCCAAATACTGAATATTCAAATGAGAAGAACATTACACAAAACATTTAAGGTATGATAATTTGATGTAGACTTTCTGATTGTGACATATCACTGTAAGGA 5800 La-Murin-P6R (←) 5801 AATATTTATTTGTCCTTTACAGGGGTCAATATTTGCTGTGTTTGATAGTATTCAGTCTGCAAAGAAGTTTGTGGAGATCCCTGGCCAGAAGTACAAAGAC 5900 5901 ACTAACCTGCTAATACTCTTTAAGTAAGTCTTTTCTTAGGTTTCTCAGACCACAAAATTTTATTGGGAATTGATACAATGGGGTAAGGTAAACAACAGCA 6000 6001 CCTCCCACATAGTTAATATCATTTTGGTAGCTCTGAAACAGTTCAGGGGTAATTATAGTCTAAGGTTACTTATTTTTATTGCCTTGAGGTATGTATGGTT 6100 6101 ATGATGGAGGTCCACCTGGGCCTTAACATGCATGTGGAGGTCAGAGGACAACTCTGTAGTCAGCTCTCTCCTTCCACTTTATAGGGATTCCAGGGATTGA 6200 6201 ACTCAGGGCATCAATCTTGTGCAGCAAATGTTCTTACCTACTTGTGTGAGTCGTTAGAATTAAACTTGGGGGGCTGGAGAGATGGCTCAGTGGTTAAGAG 6300 6301 CACTGACTGCTCTTCCTTAGGTCCTGAGTTCAATTCCCAGCAAATCATATAAATATTATAAATAAATATTTAAAAAAAAAAAGAATCAAACTTGGGTTGT 6400 6401 CAGGCTTAGTAGCAGGTCATTTACATGATGAGCCATCATCTCTCTAGCCCTGCTAATAACTTTTCATTATTAGTGACTAGTGAGAAAAGTTGTTTAGTAT 6500 6501 TTATTTTGCATCTAAAACGTAAGGAAAATAGAGGTAATCAGAATGCTTAAATGTTTGGTTCTCATGTTTGGTTATTTTTCAGATTGTATATAAACATTTT 6600 6601 TTTAACATACATGTAGTATAAAGATAGGAGGCTTGGGCCACAATCTTGTATGATAAGATAAAAGTGAGGCCAGCTATAAAGACGCAACAGAGGTTAATAG 6700 6701 GAGTACGACTATTTTCCAAAGGTCCCAGATTCAATTTCTAGCACCCATATAACAACTTTAAGTTGTCCATAACATGTTAGTCTTTAGACTTAACATCCTC 6800 6801 TTTAGGTCTCAGGTACCATGCATGCATGTGGTACACAGATATACACATAAAATAAAAACTTAGGACATTCTGGGCAGTGGTGGCACATACCTTTAATCCC 6900 6901 AGCACTAAGGAGACGGAGGCAGGTGGATCTCTCTGTGAGGTCAAGGCTAGCCTGGTCTACAGAAGTAGTTCTGGGGGACAGCTAAGACTCCCCACAAATG 7000 7001 TTGTCTTGAAAACCAAGGGGAAAAAAGTAGTTTTCAGTCTTTGTGAGCTTAGCCTGTGTTTTATGTTCTTCAGGGAAGATTACTTTGCAAAAAAAAATGA 7100 La-Murin-P7 (→) 7101 AGAAAGAAAGCAGAGCAAAGTGGAAGCTAAATTAAAAGCTAAACAGTAAGTCTGTTGACTTCTTTGTGACATTCTTAATTTTCTTAATGTTTTGACAAGT 7200 7201 TTAACTAGTTATTCTGGGACAAGCCGATGATGAGCTTTGAAATGAGTGGTAATGGCTCTGCCAGTATTGGTAATTGAAATGTTGGCCTCAAGATACCTTG 7300 7301 ATCAACCATTTTGCTGGTGTTGTATGATTGAAAAAAGAAAAAAACCCAAAGGACTTGCTTTGATGAAATGGGTTGGTGGTAATGTTCAAGGTTATGTAAG 7400 La-Murin-P8R (←) La-Murin-P8 (→) 7401 TATAAACACATTATAATCATAAGACATTGTTTTTAGAGAGCATGAAGGAAGACACAAGCCAGGAAGTACTGAAACCGTAAGTACTAATAACTAAAACATG 7500 7501 AGATAATTTAAGGTAGAATTTTTTTTTTTGAAGTTACATTTTGTGTGTGTGTTGTATTGTATGGGTACACCGTTACATGCCACTGCAATTGTGTACAGGT 7600 7601 CAGAAGTCTCCATGTGTATCCCAGGGATTACAGTCAGGTTGTTAGCCTTGGCAATAAGCACTTTTACCATTACCCGCTGACCAATCTGCTGGCCGAGATA 7700 7701 GAGTCTCACTATGTAAGTCTAGCTGGTCTAGAATTGGCTATGTAGATCAGTAGGCCTCACATTTGGAGACATACACCTGATTCTACCTCCCAGCTACTGG 7800 7801 GATTTAAGAAAGGCACATACCACCATGTCCAATGTGTATGCTGGTACACATGGTACCTGCACCAACTATATCACTTATGCCTCGAGCACTGTGTGAGGAC 7900 7901 CGTGTGAGAATGTGTTTGAGTGTGTTGCATTAGTGATACACAAATACTGTTATCTGGGATTATTACTTAATAGCAGATAGTTATATTAAACCATCACCTA 8000 8001 TAGAAGAAACTAAAGTAAAGCCTTTGTAAGACATGACAGCCGAGACGAATACACAGTTTCACTGCATTAAAGTAGTTCTGATATATCTTTTTCCTATGTA 8100 8101 GGTATAGAATGACTTGAGCCATTTTGGTGAGGTTGCACTTAAGAAAGGCTTTTGATGGCCTTGTATATTTTTATAGAGAGCTCTAGAAGGAAAGATGGGA 8200 La-Murin-P9R (←) La-Murin-P9 (→) 8201 TGCTTACTGAAGTTTTCAGGTGACTTGGATGACCAGACCTGTAGAGAAGATTTACACTTCCTTTTCTCAAATCATGGTGAAATAAAATGGGTCGACTTTG 8300 8301 CCAGAGGAGCAAAAGAGGTTTGGAAACATTTGTGTCCTTATTAGCAATTGCTTTAAAAGTCTGTAGAATGTTATCTCTTAGAAGAAAAAATTATTTAGAA 8400 8401 AGTAGTTGTTTTAAAAACTAGTTGTTATAAAGCATGTTAATTGAAATAGTTCCTAATTAGTCATTTACTTTTGTCTTTGGTCCTTTAATTGGATGTGATG 8500 8501 TCTTTTCCCCTCCTTGTCAGATGGGTAATATGCTGACGTTGAAACAAGATTTTGGGAGGAACAGGTCATGAAAATTGAAAATAGAAATAACAGATAGGAA 8600 8601 AGGTGTGTGTGGAGGGTAGTAAGAAATTGTCAGACTACAAACTAAAGAGTGAAACATTCATTTTTCTCTTTGATGTGTAGGGAATAATTCTCTTCAAAGA 8700 8701 AAAGGCTAAGGAAGCACTTGAGAAAGCCAGAAATGCAAATAATGGTAACCTACTGTTAAGGAACAAAAAGGTGACTTGGAAAGTACTAGAAGGACATGCG 8800 8801 GAAAAAGAAGCATTGAAAAAAATCACAGATGATCAGCAAGAATCCCTAAACAAATGGAAGTCAAAAGGAGGGCATGCAGGTGGAAGATTTAAAGGAAGCC 8900 La-Murin-P10 (→) La-Murin-P10R (←) 8901 ATGTTTTTACAGCAGCCCGCAGATTTAAAGGAAAAGGGAAGGGTAATAGGCCTGGTTATGCTGGGGCACCCAAAGGAAGAGGACAGTTTCATGGAAGGAG 9000 9001 GACAAGATTTGATGATGATGATCGTCGTCGTGGTAAGTCTTTACTAATTCCTTTGGGAGCGAAATCTATAGTAAGATACTATTTCTCTGTCTAAGTGATA 9100 9101 TTCTTGAATTAGTACCGTCTTCCTTGCTTGTATTGTTTCACAAGTGAGAGGTTGGTTGAAAGATAAATTTAGAGATCAAAGGAAAGACTACTTAAGGAAA 9200 9201 GCTTTTCTCCTTGAAGGGAAGATGCATTTTTTTTTTAAGGAGGCTATTACCAATACTTGTAATCGTTATTACTAAAACAGTGCTAACAGTGAATTTAACA 9300 9301 AAATTATTTGTTGTAATAGGACCAATGAAAAGAGGAAGAGATGGAAGAGACAGAGAAGAACCCGCATCAAAGCATAAGAAAAGAGAAAATGGTGCTAGAG 9400 9401 ACAAGTAGTTTATTTAGTAAGCAGTGTTTTTATTCCTTAGTTAGATTTTAAGCTGCTTTTTGTCTTCAGAAGCTTTTAAAAAGAAAAGCGAATTAGGTCC 9500 GWK-Ex11-R2-nested (←) 9501 ACTTCGATGTCACCTGTATAAAGGAAAATTTTGTTTACTTCTTTTGTTGTATCAATCAAGTTTTTAAAATGTATAGTTCTGTTTGTGTTTGGATGATTAA 9600 9601 AATATGAGAAGGAAGATTCTTCCTCTTAATTGTCTTTGAATATGAGAATGTATTAGTACAGATTGTAAAATATATACTGTATAAAAATAGCCAATAGTTC 9700 9701 TTTCTTCTTTTTATTTCTCTTAAAACGTTTCATAAAGAACTTCAACTAAAATATTAGCTCTTGCGAGTATAAGCCCTTCTTCCCACAGCTAATTTGTCTA 9800 9801 ATCTCTCATGCTGACTTTATATTTACCCATTTACCTTGGTAAGAGTGAAATAACCATTACAAAAGCTTTTGAATACTGGATGTACACAGACTACAATTGG 9900 9901 AAAACTTACAGATTTCTTTTTATGAAAGTTGTATAATGCTGGTAGATCATATCGAAGCTCTGTTAAAAAAAAAAGCCCGACA 10000
8 Anhang 143 8.3 Lage aller Oligonukleotide in der murinen La/SS-B-cDNA In der folgenden murinen La/SS-B-cDNA-Sequenz sind alle Primer und Sonden enthalten, die für PCRs mit La/SS-B-cDNAs und in situ-Hybridisierungen verwendet werden. Vorwärtsprimer sind durch (→), Rückwärtsprimer durch (←) gekennzeichnet. Alle Rückwärtsprimer tragen außerdem den Zusatz „-R“ oder „-Rück“. Fett dargestellt sind das Start-AUG im Exon 2, das Stop-Codon im Exon 11 und artifizielle Restriktionsschnittstellen in den Primersequenzen. Die drei alternativen Exon 1 (Exon 1a, 1b und 1c) sind einzeln dargestellt. Die Sequenz beginnt mit dem ersten alternativen Exon 1 (Exon 1a bzw. Exon 1b). Im ersten Exon ist die Sequenz doppelt unterstrichen, um die das Exon 1b im Vergleich zum Exon 1a verlängert ist. Ab dem Exon 2 ist jedes geradzahlige Exon unterstrichen. Das Exon 11 ist doppelt unterstrichen, um es von der 3’-UTR abzugrenzen. Exon 1a / Exon 1b Iso-Ex1a/b-Vor (→) GAATTCCAGGCGCTTCTGTCGTTG Maus-mRNA-F1 (→) Maus- CAGGCGCTTCTGTCGTTGT TGAAGCTG 1 TGCTGTCGGGCCCGCCGGCGCTCGGAAGTCCAGGCGCTTCTGTCGTTGTTCTTGAAGCTG 60 Exon 1b-antisense/sense ATCCGAATCTTTGAGGTGAGCTTCTG mRNA-F2 (→) Exon 1a-antisense/sense TGGTGACCGTG AGGTGAGCTTCTTGGAGACTGAGGAGA 61 TGGTGACCGTGGGATCCGAATCTTTGAGGTGAGCTTCTTGGAGACTGAGGAGA 113 Exon 1c 1 TTACCAACTACATGAAGAGTTTGGTTACAAAGTAGGATTTACTGGGAGGAGGGGTTGTTG 60 61 ATCTGAGTTTTCCATCCATAATCCAAGGTGTTGCTTTGTTGAGATGTATGAGAATTCATA 120 Exon 1c-antisense/sense TACTC Iso-Ex1c-Vor (→) GAATTCACTC Maus-mRMA-F3 (→) ACTC 121 GGGAAACCTGTAAGGTTAGGAATTCTTGAAATTAAAAAAAAAGTGGCATACTTTTTACTC 180 Exon 1c-antisense/sense ATTCTCTTGTATTGACTATTATATA Iso-Ex1c-Vor (→) ATTCTCTTGTATTGACTA Maus-mRMA-F3 (→) ATTCTCTTGTATTGACTAT 181 ATTCTCTTGTATTGACTATTATATAAAAATAATAACCTTCCTACC 240 Exon 2 – Exon 11 La-Murin-RT-PCR-Vor (→) 1 GAATTCGAAACTTTACAGATAGCCAC AGTGTGAGAAACTTTACAGATAGCCACA 28 29 ATGGCTGAAAATGGAGATAATGAAAAAATGACTGCTTTGGAGGCCAAAATCTGTCATCAA 88 1 M A E N G D N E K M T A L E A K I C H Q 20 89 ATTGAGTATTATTTTGGAGACTTCAATTTGCCACGAGACAAGTTTTTAAAAGAACAGATC 148 21 I E Y Y F G D F N L P R D K F L K E Q I 40 149 AAATTGGATGAAGGCTGGGTACCTTTGGAAACAATGATAAAATTCAACAGGCTAAACCGG 208 41 K L D E G W V P L E T M I K F N R L N R 60 209 CTGACAACAGACTTTAATGTAATTGTGCAAGCACTGAGCAAATCTAAGGCAAAACTCATG 268 61 L T T D F N V I V Q A L S K S K A K L M 80 Maus-mRNA-R1 (←) TAGAAGATCACCAAGCAGACC 269 GAAGTCAGTGCAGACAAAACTAAAATTAGAAGATCACCAAGCAGACCACTCCCTGAAGTG 328 81 E V S A D K T K I R R S P S R P L P E V 100 La-Murin-P5R (←) GTTTCCCAACT 329 ACGGATGAGTATAAGAATGATGTAAAAAACAGATCTGTTTATATTAAAGGTTTCCCAACT 388 101 T D E Y K N D V K N R S V Y I K G F P T 120 La-Murin-P5R (←) GACGCCACCC 389 GACGCCACCCTTGATGATATAAAAGAATGGCTAGACGATAAAGGCCAAATACTGAATATT 448 121 D A T L D D I K E W L D D K G Q I L N I 140
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2 1 Einleitung variabel mit untersc
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4 ⇒ 1 Einleitung bei den Autoanti
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6 1 Einleitung humane La/SS-B-Gen z
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8 1 Einleitung Lokalisation oder di
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28 3 Materialien 3.11 Genomische DN
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32 3 Materialien Primer für den Ge
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36 4 Methoden Dadurch gelang es, Fr
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42 4 Methoden Anlagerungs-Temperatu
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46 4 Methoden abgesaugt, das Pellet
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50 4 Methoden 4.33 In situ-Hybridis
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52 4 Methoden 5000 g abzentrifugier
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54 4 Methoden 4.39 Färbung von SDS
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56 4 Methoden 4.44 Antikörper-Elut
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58 4 Methoden abzentrifugiert, der
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5 Ergebnisse 63 genome walking durc
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5 Ergebnisse 65 B) Untersuchung der
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5 Ergebnisse 67 Mit allen antisense
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5 Ergebnisse 69 PCR-Produkte des Pr
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5 Ergebnisse 71 Abb. 9: Nachweis de
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5 Ergebnisse 73 In Laufspur (D) wur
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