verzeichnisse - ArchiMeD - Johannes Gutenberg-Universität Mainz

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banden. Die Sonde Ex1a-antisense (3.20) erkannte die splice-Übergangssequenz zwischen
dem Exon 1a und 2 und detektierte somit die Exon 1a-mRNA-Isoform. Die Sonde
Ex1b-antisense (3.20) sollte in der Sequenz der 27 Nukleotiden binden, um die das Exon 1b im
Vergleich zum Exon 1a verlängert war, und detektierte somit die Exon 1b-mRNA-Isoform. Die
Sonde Ex1c-antisense (3.20) band an ein Sequenzstück des Exon 1c und detektierte somit die
Exon 1c-mRNA-Isoform. Um unspezifische Bindungen auszuschließen, wurden als Kontrollen
die Sonden Ex1a-sense, Ex1b-sense und Ex1c-sense hergestellt, die nicht binden sollten. Des
weiteren wurden Zellen nur mit dem Nachweisreagenz behandelt, um unspezifische Reaktionen
bei der Nachweisfärbung auszuschließen. Alle Sonden wurden Dig-markiert (4.33), so dass sie
nach Bindung an ihre spezifische mRNA-Sequenz mit dem AK anti-Dig AP-Konjugat (3.13) im
NBT-X-Phosphat-System (4.33) nachgewiesen werden konnten. Mittels eines Dot Blots (4.33)
wurde die Effizienz der Sondenmarkierung überprüft. In Abb. 7 ist die lichtmikroskopische
Auswertung der in situ-Hybridisierung dargestellt.
Abb. 7: In situ-Hybridisierung der murinen La/SS-B-mRNA-Isoformen an
NIH-3T3-Zellen
Die Zellen wurden bei 400x Vergrößerung dokumentiert.