verzeichnisse - ArchiMeD - Johannes Gutenberg-Universität Mainz

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CHAMBERS et al. (1988) erhaltenen Ergebnissen für das humane La/SS-B überein, bei dem
die 5’-Anfänge der mRNA-Isoformen ebenfalls stark variierten. Dies war typisch für
Haushaltsgene mit einem Promotor ohne TATA-Box (MELTON et al., 1986). Somit stellten die
drei bisher gefundenen murinen La/SS-B-mRNA-Isoformen (TOPFER et al., 1993; GRÖLZ und
BACHMANN, 1997d; unveröffentlicht) (GenBank accession No. L00993 und Y07951)
vermutlich die längsten Transkripte dar. Weitere alternative 5’-Isoformen wurden nicht
gefunden. Falls alle Isoformen einen signifikanten Beitrag zur Menge an La/SS-B-Protein
leisteten, mussten sie in ähnlichem Umfang gebildet werden. Ansonsten hätte es sich bei ihnen
auch um Nebenprodukte der Transkription handeln können. Die für die den 5’-RACE für alle
Isoformen immer die gleiche Primerkombinationen verwendet wurde und auch sonst immer
gleiche Bedingungen vorherrschten, konnten die amplifizierten PCR-Banden quantitativ
miteinander verglichen werden. Größere Konzentrationsunterschiede zwischen den
cDNA-Produkten konnten allerdings nicht festgestellt werden.
Mittels der Technik der RT-PCR sollte (5.8.2) untersucht werden, ob murine, alternative
La/SS-B-mRNA-Isoformen existierten, bei denen Exons herausgeschnitten oder Introns nicht
herausgeschnitten waren. Wie bei dem Autoantigen Ro52β/SS-A, bei dem im Vergleich zum
Ro52α/SS-A das Exon 4 herausgeschnitten wurde, könnten ganze Exons fehlen. Auch das
Pseudogen 3 des humanen La/SS-B, bei dem das Exon 3 fehlte, könnte auf die Existenz
weiterer Isoformen hindeuten (1.5.1). Splice-Varianten des murinen La/SS-B, bei denen ein
Exon deletiert war, waren nicht zu erwarten. Einmal, weil auch beim humanen La/SS-B keine
mRNAs gefunden wurden, bei denen ein Exon herausgepliced war. Auf der anderen Seite
hätten auch nur wenige Exons herausgeschnitten werden können, ohne dass es dabei zu einer
Leserasterverschiebung kommen würde. Dies wäre nur bei den Exons 5, 7 und 9 möglich
gewesen. Dabei wäre die cDNA um 108 bp, 72 bp bzw. 141 bp verkürzt gewesen. Durch eine
solche Deletion wären teilweise funktionelle Proteinbereiche deletiert worden. Intron-Insertionen
waren im Grunde gänzlich auszuschließen, da es hierbei immer zu einer Verschiebung des
Leserasters kommen würde. Alternativ gesplissene cDNA-Fragmente wurden nicht gefunden.
Die Ergebnisse der 5´-RACE- und RT-PCR-Experimente ließen die folgenden Aussagen
zu: Da keine weiteren mRNA-Isoformen des murinen La/SS-B-Gens nachgewiesen werden
konnten, musste es sich bei allen La/SS-B-cDNA-Isoformen um Derivate von vollständig
gesplissenen La/SS-B-mRNAs handeln. Die bereits gefundenen murinen mRNAs stellen
vermutlich die längsten gefundenen Transkripte dar (TOPFER et al., 1993; GenBank accession
No. L00993; GenBank accession No. Y07951), da keine verlängerten Transkripte detektiert
werden konnten. Weitere 5’-UTR-Isoformen oder splice-Varianten des La/SS-B-Gens konnten
mit der zur Zeit sensitivsten Technik, der PCR, nicht gefunden werden. Somit schien die Anzahl
an La/SS-B-mRNA-Isoformen bei Mensch und Maus identisch zu sein (1.5.1 und 1.6).