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24 Heizblock Thermomixer 5436 Heizmagnetrührer MR 3001 Heidolf Mikroskope: inverses Mikroskop Epifluoreszenz-/Lichtmikroskop IM35 pH-Meter, Modell 3500 digital Photometer: Einstrahlspektrophotometer DU-64 Durchflußspektrophotometer Röntgenfilmkassette Saugpumpe Laboport Schreiber LKB 6520 Schüttelinkubator Certomat H Semi-dry-Blotter 2117 Multiphor II Sequenzierautomat LI-COR 4000 S Spannungsgeräte: Modelle 3000Xi und 200/2.0 Multi Drive XL IEF-Cell für isoelektrischen Fokussierung Sterilisator Heraeus Function Line Thermocycler: Gene Amp PCR System 9600 Primus 96 Plus Transilluminator UV-Crosslinker Stratalinker 1800 Video-Dokumentationssystem UVP Image Store Wippschüttler WS 5 Zentrifugen: Zentrifuge C5415 (Tischzentrifuge) Labofuge Ae Biofuge fresco Capsul HF-120 Sorvall RC-2B , -5B, -RMC-14 Eppendorf Centrifuge 5804R 3 Materialien Eppendorf-Netheler-Hinz GmbH, Hamburg NeoLab Migge Laborbedarf, Heidelberg Zeiss, Oberkochen Zeiss, Oberkochen Beckmann Instruments GmbH, München Beckmann, Fullerton, USA Gynkotek, Germering Amersham Buchler GmbH, Braunschweig NeoLab Migge Laborbedarf, Heidelberg LKB, Bromma, Schweden B.Braun, Diessel Biotech GmbH, Melsungen Pharmacia LKB, Freiburg MWG-Biotech, Ebersberg Pharmacia LKB, Uppsala, Schweden Bio-Rad Laboratories, Richmond, USA Bio-Rad Laboratories, Richmond, USA Heraeus Sepatech GmbH, Hanau Perkin Elmer, Norwalk, USA MWG-Biotech, Ebersberg Carl Roth GmbH und Co., Karlsruhe Stratagene, Heidelberg Ultra Violet Products, Cambridge, GB E. Bühler, Tübingen Eppendorf-Netheler-Hinz GmbH, Hamburg Heraeus Sepatech GmbH, Hanau B. Hermle KG, Gosheim Tomy Seiko Co. LTD, Tokyo, Japan Dupont Instruments, Bad Homburg NeoLab Migge Laborbedarf, Heidelberg 3.4 Restriktionsendonukleasen Restriktionsenzyme wurden von der Firma MBI Fermentas (St. Leon-Rot) bezogen. Beim Einsatz von Enzymen wurde immer der dem Enzym beigefügte Puffer oder, falls möglich, der Puffer Y + /Tango TM verwendet. Folgende Enzyme wurden eingesetzt: EcoR I (aus Escherichia coli), Nhe I (aus Neisseria mucosa heidelbergensis), Not I (aus Nocardia otitidiscavarium) und Xho I (aus Xanthomonas holcicola).
3 Materialien 25 3.5 Kits und deren Zusammensetzung Die genaue Zusammensetzung von in Kits enthaltenen Puffern und Lösungen ist dem Protokoll des jeweiligen Herstellers zu entnehmen. 5’-RACE System (Gibco/ BRL GmbH, Eggenstein): RNase H (2 U/µl) (aus E. coli); SuperScript ΙΙ RT (200 U/µl) (aus E. coli); 0,1 M DTT; 25 mM MgCl 2 ; 10 mM dNTP-Mix; 10x PCR-Puffer für RT; DEPC-H 2 O; 5x Tailing-Puffer; 2 mM dCTP; terminale Deoxynukleotidyl-Transferase (TdT) (10U/µl); AAP-Primer; AUAP-Primer; GlassMax-Spin-Säulen; Binde-Lösung (6 M NaJ); 40x Waschpufferkonzentrat BM Chemiluminescence Blotting Kit (Biotin/Streptavidin) (Roche, Mannheim): Lumineszenzsubstratlösungen A; Startlösung B mit Wasserstoffperoxid; Blockingreagenz; Streptavidin-POD; genaue Zusammensetzungen nur dem Hersteller bekannt Dig Oligonucleotide Tailung Kit (Roche, Mannheim): 5x Reaktionspuffer; 25 mM CoCl 2 -Lösung; 1 mM Dig-dUTP-Lösung; 10 mM dATP-Lösung; terminale Transferase (50 U/µl); 2% [w/v] Glycogen-Lösung; 1% [w/v] Poly(A)-Lösung ECL-Blotting-Reagenz (Amersham Buchler GmbH & Co. KG, Braunschweig): Lumineszenzsubstratlösungen A; Startlösung B mit Wasserstoffperoxid; Blockingreagenz; genaue Zusammensetzungen nur dem Hersteller bekannt GenomeWalker Kit (Clontech Laboratories Inc., Palo Alto, USA): 5 x 20 µl GenomeWalker Libraries (à 100 µg) (MDL-1: EcoR V; MDL-2: Sca I; MDL-3: Dra I; MDL-4: Pvu II; MDL-5: Ssp I); Adapter-Primer (AP1); nested Adapter Primer (AP2); 10x Tth PCR-Reaktionspuffer; 25 mM Mg(OAc) 2 Ligations Kit (Roche, Mannheim): T4-DNA-Ligase (1 U/µl) (aus T4-Phage); 10x Ligationspuffer Linked in vitro SP6/T7-Transcription/Translation Kit-nonradioactive (Roche, Mannheim): T7-RNA-Polymerase (1 U/µl) (aus T7-Phage); 4x T7-Transkriptionspuffer; Translations-Mix; 25 mM MgOAc-Lösung; 25 mM EDTA-Lösung; SDS-Probenpuffer QIAEX Gel Extraction Kit (QIAGEN Inc., Hilden): QIAEX II-Suspension; QX1; PE QIAGEN Plasmid Midi Kit (QIAGEN Inc., Hilden): QIAGEN-tip-100-Säulen; RNase A (2 U/µl) (aus Rinderpankreas); P1; P2; P3; QBT; QC; QF QIAprep-spin Plasmid Mini Kit (QIAGEN Inc., Hilden): QIAprep-Spin-Säulen; Collection Tubes; RNase A (2 U/µl) (aus Rinderpankreas); P1; P2; N3; PE QIAquick PCR Purification Kit (QIAGEN Inc., Hilden): QIAquick Spin Säulen; Collection Tubes; PB; PE PCR Dig Probe Synthesis Kit (Roche, Mannheim): Enzym-Mix Expand High Fidelity (3,5U/µl); 10x PCR Dig Probe Synthesis Mix; 10x PCR-Puffer für Dig-PCR; 10x dNTP-Stammlösung für Dig-PCR (jeweils 2 mM dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
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[...] In diesen Zeiten Molekularbio
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