verzeichnisse - ArchiMeD - Johannes Gutenberg-Universität Mainz

1 Einleitung 7
1.5.2 Die Transkriptionsstartpunkte der mRNA-Isoformen
Die Transkriptionsstartpunkte der klassischen Exon 1-mRNA-Isoform des humanen
La/SS-B bestimmten CHAMBERS et al. (1988) mit der primer extension-Technik. Die
Transkription beginnt in einem Bereich von 19 Nukleotiden an drei Stellen. Ein variabler
Transkriptionsstart ist für Haushaltsgene typisch (MELTON et al., 1986).
Die Anfänge der beiden alternativen Exon 1’- und Exon 1’’-mRNA-Isoformen wurden mit
der Technik des 5’-RACE bestimmt (GRÖLZ et al., 1997a; GRÖLZ et al., 1997b; TRÖSTER et
al., 1994). Im Gegensatz zu der klassischen Exon 1-mRNA variieren die Anfänge der beiden
alternativen Exon 1’- und Exon 1’’-mRNAs stark. So finden sich in humanem Lebergewebe
überwiegend Transkripte mit einem 450-500 bp langen Exon 1’ bzw. Exon 1’’. Aus humanen
peripheren Blut-Lymphozyten (PBLs) können Transkripte mit einem etwa 300 bp, 220 bp und
150 bp langen Exon 1’ bzw. Exon 1’’ isoliert werden.
1.5.3 Struktur und interne Translationsinitiation der mRNA-Isoformen
Die Struktur der 5’-UTR der klassischen Exon 1-mRNA entspricht nach den Kriterien
von KOZAK (1991a, 1991b, 1986), der einer gut translatierbaren mRNA. Es finden sich keine
zusätzlichen AUGs auf der 5’-Seite des Start-AUG im Exon 2. Auch sind keine GC-reichen
Regionen oder Sekundärstrukturen enthalten. Das klasssiche Exon 1-Transkript besitzt eine
5’-UTR von etwa 100 bp und wird von einem Haushaltsgenpromotor reguliert (GRÖLZ, 1998).
Dagegen finden sich in der 5’-UTR der alternativen Exon 1’- bzw. Exon 1’’-mRNA drei
zusätzlichen Start-AUGs mit offenen Leserahmen (ORF-1 bis 3) auf der 5’-Seite des Start-AUG
im Exon 2. Außerdem sind GC-reiche Regionen, ausgedehnte Sekundärstrukturen und eine
Oligo(U) 23 -Sequenz enthalten. Das alternative Exon 1’ bzw. Exon 1’’ besitzt Länge von ca.
500 bp. Solche in 5’-UTRs finden sich auch bei anderen Haushaltsgenen, (Proto-)Onkogenen,
Wachstumsfaktorrezeptoren und Zytokinen (GRÖLZ und BACHMANN, 1997e). Die beiden
alternativen Transkripte werden von einem alternativen Promotor transkribiert, der eine
TATA-Box-ähnliche Sequenz aufweist.
Wendet man das scanning- und das leaky scanning-Modell von KOZAK (1991a, 1991b,
1986) auf die alternative Exon 1’- bzw. Exon 1’’-mRNA an, so sollte die Initiation der Translation
stark reduziert oder gänzlich unmöglich sein. GRÖLZ (1998) konnte aber zeigen, dass die
alternative Exon 1’- bzw. Exon 1’’-mRNA gut translatierbar war. Nach GRÖLZ (1998) erfolgt die
Initiation der Translation durch den internen Eintritt des Ribosoms am Start-AUG im Exon 2. An
den drei stromaufwärts gelegenen AUGs der alternativen Exon 1’- bzw. Exon 1’’-mRNA findet
keine Translationsinitiation statt (GRÖLZ et al., 1998). Die Initiation der Translation erfolgt
durch eine interne Ribosomeneintrittsstelle (IRES). Wahrscheinlich befindet sich die IRES im
Exon 2, wobei aber ein Einfluß der 3’-UTR nicht auszuschließen ist (PAUTZ, 1998). Die genaue