verzeichnisse - ArchiMeD - Johannes Gutenberg-Universität Mainz

6 Diskussion 111
Hypothetisch würde die für das humane La/SS-B-Gen beschriebene Insertions- bzw.
Deletions-Mutation beim murinen La/SS-B-Gen die gleichen Folgen ergeben. Der einzige
Unterschied bestand darin, dass die Poly-(A)-Kassette des murinen La/SS-B im Normalfall
neun Adenine enthielt (Abb. 32). Bei der Insertions-Mutation (10A-Mutation) wären es dann
zehn Adenine, bei der Deletions-Mutation (8A-Mutation) nur acht Adenine. Wie beim humanen
La/SS-B würde bei der Insertions-Mutation der Leserahmen so verschoben werden, dass die
Translation an einem neu entstandenen Stop-Codon vorzeitig abbrach (Abb. 32). Bei einer
Deletions-Mutation würde die Leserasterverschiebung die Bildung von 12 fremde AS bewirken
(Abb. 32). Diese 12 AS stimmte zwischen Mensch und Maus bis auf drei AS überein (Abb. 32:
unterstrichene AS). Neoepitope könnten bei der Entstehung von Autoimmunität und dem
triggern der Immunantwort beteiligt sein (LANZAVECCHIA, 1995) (1.5.9).
Normale Situation:
murin 9A:
AAGGAAGATTACTTTGCAAAAAAAAATGAAGAAAGAAAGCAGAGCAAAGTGGAAGCTAAATTAAAAGCTAAACAA
K E D Y F A K K N E E R K Q S K V E A K L K A K Q
human 8A: GACCTGCTAATACTTTTCAAGGACGATTACTTTGCCAAAAAAAATGAAGAAAGAAAACAAAATAAAGTGGAAGCTAAATTAAGAGCTAAACAGGAGCAAGAAGCCAAACAAAAGTTAGAA
D L L I L F K D D Y F A K K N E E R K Q N K V E A K L R A K Q E Q E A K Q K L E
Insertions-Mutation:
murin 10A:
AAGGAAGATTACTTTGCAAAAAAAAAATGA
K E D Y F A K K K *
human 9A: GACCTGCTAATACTTTTCAAGGACGATTACTTTGCCAAAAAAAAATGA
D L L I L F K D D Y F A K K K *
Deletions-Mutation:
murin 8A:
AAGGAAGATTACTTTGCAAAAAAAATGAAGAAAGAAAGCAGAGCAAAGTGGAAGCTAAATTAA
K E D Y F A K K M K K E S R A K W K L N *
human 7A: GACCTGCTAATACTTTTCAAGGACGATTACTTTGCCAAAAAAATGAAGAAAGAAAACAAAATAAAGTGGAAGCTAAATTAA
D L L I L F K D D Y F A K K M K K E N K I K W K L N *
Abb. 32: Darstellung der Poly-(A)-Kassette im Exon 7 des murinen und humanen La/SS-B mit und ohne Mutationen in der
hot spot-Region
Die Sequenzen beginnen mit der ersten Aminosäure des Exon 7. Die Poly-(A)-Kassette ist jeweils fett dargestellt. Die AS, die sich
zwischen dem humanen und murinem Neoepitop unterscheiden, sind durch Unterstreichung gekennzeichnet.
B) Analyse des murinen La/SS-B auf transkriptionaler und
translationaler Ebene
Im Zusammenhang mit der Expression der murinen mRNA-Isoformen sollte zunächst
gekärt werden, welche Größen die polyadenylierten mRNAs besaßen. Außerdem musste
überprüft werden, ob weitere mRNA-5’-UTR-Transkripte oder alternative splice-Transkripte
existierten. Des weiteren sollte ermittelt werden, ob es sich um fertig prozessierte,
zytoplasmatische und funktionelle mRNAs handelte, die für die Synthese von La/SS-B-Protein
genutzt wurden, und ob das Protein vom Zellkern in das Ztyoplasma translokalisiert wurde,
wenn die Translation von einer bestimmte mRNA-Isoform erfolgte. Außerdem sollte festgestellt
werden, ob es eine gewebeabhängige oder zellspezifische Expression der mRNA-Isoformen