verzeichnisse - ArchiMeD - Johannes Gutenberg-Universität Mainz

5 Ergebnisse 63
genome walking durch PCR mit genomischer DNA erhalten werden. Für das Intron 6 konnte
kein geeignetes Primerpaar gefunden werden. Daher wurde dieses Intron mit weiter 5’- bzw- 3’-
liegenden Primern amplifiziert, was zur Folge hatte, dass es zusätzlich mit den
La/SS-B-genspezifischen internen Sequenzierungs-Primern BaInt1 und BaInt2 sequenziert
werden musste. Dabei diente die mit den pGEM-T-Standard-Primern ermittelte Sequenz zum
Entwurf dieser Primer.
Der Promotorbereich konnte weder durch PCR mit genomischer DNA noch durch
genome walking ermittelt werden. Durch Sequenzierung eines genomischen La/SS-B-Klons
einer Cosmid-Genbank mit dem Primer La-Murin-P1R (3.20) konnte die Promotorsequenz
erhalten werden (SCHÖRNER und BACHMANN, 2000; unveröffentlicht).
Alle ermittelten Sequenzen wurden zusammengefügt und mit der murinen cDNA-
Sequenz (TOPFER et al., 1993) kombiniert. Auf diese Weise wurde die komplette genomische
Sequenz des murinen La/SS-B-Gens erhalten. Diese Sequenz ist in Abb. 5 dargestellt.
Abb. 5: Sequenz des murinen La/SS-B-Gens
Alle Exons sind umrandet. Fett dargestellt sind der Promotorbereich zu Beginn der Sequenz, die Poly(T) 17-Region im Intron 1,
das Start-AUG im Exon 2, die 9A-Kassette im Exon 7, das AUG-Codon zu Beginn der C-terminalen Proteinhälfte (M223) im
Exon 9 und das Stop-Codon im Exon 11. Nach dem Promotor folgt das Exon 1a bzw. Exon 1b. Die Sequenz, um die das
Exon 1b im Vergleich zum Exon 1a verlängert ist, ist unterstrichen. Da sich das Exon 1c direkt vor dem Exon 2 befindet, ist
dieses durch Unterstreichung gekennzeichnet. Die 146 bp, um die die Exon 1c-Sequenz von MARRA et al. (1996;
unveröffentlicht; GenBank accession No AA798418) im Vergleich zu der Exon 1c-Sequenz, die von TOPFER et al. (1993)
gefunden wurde, verlängert ist, sind kursiv dargestellt.
-600 ANCCCCNACNCCNTTNAAGKSRAATNN -501
-500 NTTTNNAAAGGCCAANNCTKTGGCCCNCCCCTTTWATAATTNCAANACNCCCGGAAAAGGTAGNNNAATTTCYCAACAAAGGNAGGAGGAGTTTTAGGGT -401
-400 CANCCTGGTCTAAARANNAGCCCGAGTTCCTGGATAGCCGGGGCTTCSCCCGGAAACGCTKTCCCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA -301
-300 AARRRRAAAGGGGGAAAAAAAGAAAAACCAAGCGCTACAGAAGAAAGAAGGGAAGGCTCGAACATACTGCCCAGAAACACATTAAARACAAAGATCTCCA -201
-200 CAAAAAACACTTCCTGTCAGCCCCTAACATTCTGCTGAGCAATTTAACAATTTCTCGGGCGGGAGTTCCGGCGAGACGACTCTCCTTCAGATTGTGGAGC -101
-100 TCGTAACGGCCGTGCGCGGAAAGCAGAGCCGGGCCACTGCGTCCGCGCCCACGCCCACCTGTCCGCAAGGGCTGCCGGGAAAGCCCCCATCTTTAAGCGC -1
1 TGCTGTCGGGCCCGCCGGCGCTCGGAAGTCCAGGCGCTTCTGTCGTTGTTCTTGAAGCTGTGGTGACCGTGGGATCCGAATCTTTGAGGTGAGCTTCTTG 100
101 GAGACTGAGGAGAAGGTACGAAGGGCTGTGCTATGCGCAGGCCTCACCTTCCTCTCCGCGCCGCCGCGTGGGCCGCGCGGCCCGTGGCCGTGTGCTGGAC 200
201 CGCGGCCCGAGGGGGCGCGGGCCTCGGCGAGGCCACGGAGCGGGCCCCGGCCAGAGATGCGGGCGCCTGGGGCTTTCCACGTGGCAGGGATCCCGGCGGG 300
301 CCGGTGTGGGAGGATGCGGCTCTCGCGGGGCCTTTAGGCAGAGGCTCGCCGCATCCTCACGGCGTCCTTTCGGTTTGTTCCTTGCACCCCTTTCCTGACT 400
401 GGCCAGAGGCGGATGTTTCGGACCATTTAAGTCTTTAGGGTGGTCGGTGCGGGTTAAACGCGACAGGGTTCTGTGGGGACTGACTGGAGGCCGAAGAAGT 500
501 GGGGGCCGCTATTGGGTTCCCAGCGTCGCTATCTTTTTTTTTTTTTTTTTCCTTCAAAGAACTGCCATTGCCATTCTGTCTTCAGTGTGAAACAGTCCCT 600
601 AAATTGGGTAGGCCGCAGAAGTCTTGCAGGGGCTAACTAGGTCGGTATTGACCTGTGTCTCTGTAGTAATGAGAAGTGAGATTGTTGGTAGTGGGAGACA 700
701 AACCAGCGCCTGTAACAGTAAATTCTGAAGTGGGACGTGTACTTCGTAGATTTCCCATTACAGGACCAGTGTATCGCCAGCAGTCTCCAGCATTTTGAGC 800
801 AATGTCTCAAGAAATATACCAACAGTAACTCATAACTATATTCAGCTGCTGCAGATAAACTCTTCAAGAGCTGGTATACTTCCGTACAATATGGTAGGGT 900
901 GGTTTAGTAAGGCGCTGGAAGCCAGTAAGACAGAAGATCCGGTTTGTGATTTCTAGCAAACCAGTATCACAGTCCCTCTTTATTCTAGGATTGCTGTCAG 1000
1001 ACCGTGAAACAGGAAAGTGGCTATAGAGTTAACCAGTGTAGTAGTGTTTTAGGCACATCCTTACCTTCCAGCGTCCCTAGTTTAAAATTTTTTGTATCTG 1100
1101 TGCTCACAAGGTCCCATTTTTCTTGTATTCTCCTATATAGTGTCTAACACCGTAACTTTCATATCTGAACTCTATTTTCATTTTTACCAGTAATAAGTTT 1200
1201 TGGTAAGTCAGCTGTGACTAATTTTGAAAAGAAACGCAAATAATTGGCATTGAGGGCTATAGGAATATACTGCTGGCAGACTATAATACTGATATTTTTA 1300
1301 AAGCTAGGAATGATTGAGGGGTAGTTAAGTGGACATTTTCTGCTTTTTTGTTTTTATCGCTGAACTTTGCTTTACCAACTACATGAAGAGTTTGGTTACA 1400
1401 AAGTAGGATTTACTGGGAGGAGGGGTTGTTGATCTGAGTTTTCCATCCATAATCCAAGGTGTTGCTTTGTTGAGATGTATGAGAATTCATAGGGAAACCT 1500
1501 GTAAGGTTAGGAATTCTTGAAATTAAAAAAAAAGTGGCATACTTTTTACTCATTCTCTTGTATTGACTATTATATAAAAATAATAACCTTCCTACCAGTG 1600
1601 TGAGAAACTTTACAGATAGCCACAATGGCTGAAAATGGAGATAATGAAAAAATGACTGCTTTGGAGGCCAAAATCTGTCATCAAATTGAGGTATGATTCT 1700
1701 TGTGTGGTTAAATTGTAACTTAAGATGAAAACAGAACATCTAATAGCGATATGTGGGCTTTTCAAACAACTGGCTTAGCTTTGATTCTTGGAGTTAATAT 1800
1801 GAATGTATTCATATTAGGGCAAAGTTAGAAGTCTCAAGAATTACAGACATTCCAAAGGTAACACTGTAGACTGGTGTTTATTTTTGAGACACAGAGTTCT 1900
1901 CAAGTCTGTAAAATGGAGGTAATATTTGTCAGTTGATGTGAAAATTAATGGTGTGCCTAATATCTAACAAGCTAGCATAAATTCCATGGTAAAGTACTTC 2000
2001 TGGTCAAATAATAGTTTATTCTATCTAGTTAGTTCTCTTCTAAAAAGTTAACATAACTTTTTAACAAATTATGCATTTCAAAAGTCCTGTTAGACTGTTC 2100
2101 TCCACTTCTCTCTCTGCGTGCACTTAGCCCCTTCTCTCTTTCTCTCTTTTCTGCCCCACTTCCCCATGGAGACTTCCCTGGCCTTCATCCTTGGGGCCAG 2200
2201 TGATCTTGCCCATCTAAGATCAGCTTCCCAATAAACCTGCATTTAATATAATCTTAAAAAAAAAAAAAAGAAAGAAAAATAACAAAAGTCCTGTTAGCAT 2300
2301 TTCAAATTTAGGTTTAGATGGAATGTTGTCAGTAACAGAATGGCTGTGGGGAAATTGCCCATAAATTGCTTTTATGCCATGAAATAACCATTGGTTAGTG 2400
2401 TGTGTGCTCTTTTTTTTCCATTTCTTAGCTGTTTTGGTTTTGTTTTAACTTGTACACCTTTGTCCTTTAAATTGTCCTGCTTTTATTTTTCGTTTCTCAT 2500
2501 ATTTTCCCCCTTCTGAGTAATGGAGATCAAACTCAAGGCATGCTAGGCAGTCACTCAGTGAGCTGTAGGCATTTGCGGCTACAAATGTTGTCTGATTTTT 2600
2601 TTAAAAAATTATTTATTTTTATGTGCATTGGTGTTTTGTCTGCATGTATGTCTGTGTGAAGGATCCCCCGGAACTAGAGTTACAGACAGTTGTGAGCTTC 2700
2701 TATGTGGATGCCAAGAATTGAACCTGGGTCCTCCGGAAGAGCAGCTAGTTCTTTTAACTGCTGAACCATCTCCAGCCCCTTTTGTTTGATTGGGGGAAAA 2800
2801 AATTGTGTTTTCTTAATAATTGCAAAAGCAGTGATAAGATAATTTGCTGTTTAATGCTTGGAACAATAGCAAATTTGTTATAGAAAAGAATAATGTTCCT 2900