verzeichnisse - ArchiMeD - Johannes Gutenberg-Universität Mainz

6 Diskussion 105
6.5 Der alternative Promotor
Bei der Untersuchung, wie es zur Entstehung der alternativen mRNAs des humanen
La/SS-B kommen konnte, fand GRÖLZ (1998), dass das humane Gen einen zweiten,
alternativen Promotor besaß und die verschiedenen mRNA-Isoformen durch einen
Promotorwechsel in Kombination mit alternativem splicing entstanden. Der alternative Promotor
lag im Intron 1 nach dem Exon 1 und dehnte sich bis in das alternative Exon 1’ hinein aus
(1.5.1 und Abb. 2). Mit dem Programm HUSAR (3.17) wurden in diesem Bereich Bindestellen
für AP1 und TFIID gefunden. Im Exon 1’, stromaufwärts der Poly(dT)-Sequenz (8.1), befanden
sich zwei weitere Konsensussequenzen für Sp1, zwei für AP2 und eine Bindestelle für NF-κB
(GRÖLZ, 1998). Etwa 20 bp stromaufwärts des Transkriptionsstarts des längsten alternativen
Exon 1’- bzw. Exon 1’’-Transkripts wurde eine von der TATA-Box-Konsensussequenz
abweichende TFIID-Bindesequenz (TACAAA) gefunden. Diese Sequenz fungierte beim
EIIaL-Gen des Adeno-Virus als schwacher Promotor (HUANG et al., 1988) und könnte bei der
Transkription der alternativen Exon 1’- bzw. Exon 1’’-mRNA-Isoformen das
core-Promotor-Element darstellen. Da sich die humane Exon 1’’-La/SS-B-mRNA von der
Exon 1’-La/SS-B-mRNA nur um vier Nukleotide am 3’-Ende unterschied, wurde davon
ausgegangen, dass die beiden Isoformen durch alternatives splicing einer gemeinsamen
Vorläufer-RNA entstanden (1.5.1). Die Transkription dieser mRNA-Isoformen erfolgte von dem
alternativen Promotor aus. Somit verfügten die klassische Exon 1- und die alternativen Exon 1’-
bzw. Exon 1’’-mRNA-Isoformen jeweils über einen eigenen Promotor (1.5.1 und Abb. 2). Die
Promotoren der Exon 1- und Exon 1’- bzw. Exon 1’’-Isoformen könnten darüber hinaus auf
gemeinsame regulatorische Elemente zurückgegriffen und sich gegenseitig positiv oder negativ
beeinflusst haben. Offensichtlich hemmte ein Sequenzbereich stromaufwärts des
Transkriptionsstarts der Exon 1-mRNA-Isoform selektiv den alternativen Promotor. Dies war ein
Hinweis darauf, dass es regulatorische Elemente gab, die selektiv die Transkriptionsrate der
alternativen Isoformen beeinflussten (GRÖLZ, 1998).
Um zu überprüfen, ob das murine La/SS-B-Gen neben dem Basis-Promotor, wie das
humane La/SS-B-Gen, einen zweiten, alternativen Promotor besitzen und ob die Transkription
der drei murinen La/SS-B-mRNA-Isoformen ebenfalls durch einen Promotorwechsel in
Kombination mit alternativem splicing entstehen könnte, wurde der Bereich, den das Intron 1
und Exon 1c des murinen La/SS-B-Gens umfasste (Abb. 5), mit dem Programm HUSAR (3.17)
nach Promotorelementen und TF-Bindestellen abgesucht.
Die Positionen der hierbei gefunden TFs sind in Abb. 28 dargestellt. Es fand sich eine
TATA-Box und Bindestellen für MTF-1 und PPAR. Außerdem ließ sich eine Bindestelle für
NF-1/L (nuclear factor-1 oder CCAAT-Box-TF CTF) detektieren. Weiterhin wurden Bindestellen
für c-Fos und c-Jun, insbesondere für JunD gefunden. Ebenso wurden Bindestellen für AP-1
und AP-2 detektiert. Des weiteren fand sich eine Bindestelle für TCF-1A. Außerdem waren
SP1- und TFIID-Bindestellen vorhanden. Des weiteren fanden sich Bindestellen für c-Myc.