verzeichnisse - ArchiMeD - Johannes Gutenberg-Universität Mainz

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7 Zusammenfassung
Polyadenylierungssequenzen, da die klassische Polyadenylierungssequenz im murinen
La/SS-B nicht existierte. Die polyadenylierten mRNAs besaßen eine Länge von etwa 1,8 kb.
Bei den murinen mRNA-Isoformen handelte es sich nicht um precursor-mRNAs,
sondern um vollständig gesplissene, zytoplasmatische und funktionelle mRNAs, die mit gleicher
Effizienz zu La/SS-B-Protein translatiert wurden. Die Initiation der Translation erfolgte nicht wie
beim humanen La/SS-B durch eine interne Translationsinitiation mittels einer internen
Ribomsomeneintrittsstelle (IRES), sondern durch das scanning-Modell für Vertebraten von
KOZAK. Die Exon 1a- und die Exon 1c-mRNA-Isoform wurden ubiquitär exprimiert. Dagegen
fand sich die Exon 1b-mRNA-Isoform ausschließlich in proliferierenden Zellkulturen mit
Tumorcharakter. Weitere alternative mRNA-Isoformen oder an der 5’-Seite verlängerte
Transkripte gab es nicht. Jede mRNA-Isoform codierte für nukleäres La/SS-B-Protein.
Das murine La/SS-B-Phosphoprotein bestand aus 415 AS und besaß ein theoretisches
MW von 47,7 kDa. Es hatte 76,7% Homologie zu dem humanen La/SS-B-Protein.
Spezies-spezifischen Unterschiede wiesen auf eine Optimierung des Proteins auf die jeweilige
Spezies hin. Im ATP-Bindemotiv des murinen La/SS-B fand sich im Vergleich zum humanen
eine Insertion von 16 AS, die eine Nager-spezifische Insertion darstellen könnte (TOPFER et
al., 1993). Auf cDNA-Ebene fanden sich in der C-terminalen Nukleotidsequenz eine
Nager-spezifische Insertion und eine Deletion.
Posttranslational modifiziertes, murines La/SS-B-Protein besaß eine hohe
Ladungsheterogenität und ließ sich in der 2D-Gelelektrophorese in 16 isoelektrische
Proteinformen mit einem pI zwischen 5,1 und 6,1 auftrennen. Davon ließen sich vermutlich nur
drei isoelektrische Proteinformen auf Phosphorylierungen zurückführen. Auch humanes
La/SS-B-Protein ließ sich in 16 isoelektrische Formen auftrennen, wobei nur vier davon auf
Phosphorylierungen zurückzuführen waren.
Zusammenfassend ließ sich feststellen, dass sich die physiologische Expression des
murinen La/SS-B sehr gut in Einklang mit der humanen bringen ließ. Somit stellte das murine
Tiermodell ein geeignetes System zu weiteren Untersuchungen bei pathophysiologischen
Expressionsveränderungen dar.
Die Expression des murinen La/SS-B-Proteins konnte durch Stickstoffmonoxid (NO) um
das 5fache gesteigert werden. Außerdem bewirkte NO eine Translokation des Proteins vom
Zellkern in das Zytoplasma oder sogar auf die Zelloberfläche. Damit könnte NO eine pathogene
Funktion zugeordnet werden, da somit eines der Zielautoantigene von Kollagenosen dem
Immunsystem zugänglich gemacht wurde.
Nach Immunisierung des humanen La/SS-B-Neoepitops ließen sich AK gegen das
Neoepitop, humanes und murines La/SS-B-Protein induzieren. Damit konnte die Entstehung
von ANAs teilweise auf einen Autoantigen-getriebenen Mechanismus infolge einer fehlerhaften
Proteinexpression zurückgeführt werden. Die AK erkannten nur Konformationsepitope. Durch
die induzierten AK ausgelöste zellschädigende Vorläuferreaktionen, die für die
Krankheitsentstehung hätten verantwortlich sein können, waren nicht festzustellen.