verzeichnisse - ArchiMeD - Johannes Gutenberg-Universität Mainz

5 Ergebnisse 93
Die in Kulturmedium gehaltenen NIH-3T3-Zellen (Abb. 23: Bild 0 und 6), zeigten die
typische, nukleäre Färbung. Auch bei den Zellen, die verschieden lang mit GSNO inkubiert
wurden (Abb. 23: Bilder 1-5), ließ sich größtenteils die typische, nukleäre Proteinlokalisation
detektieren. Allerdings traten auch Kern- und Zytoplasmafärbung oder nur zytoplasmatische
Färbung auf. Eine Zunahme der Translokation in das Zytoplasma konnte auch bei längerer
Inkubationsdauer nicht ermittelt werden. Nicht auszuschließen war bei einigen Zellen auch eine
Translokation bis auf die Zelloberfläche.
5.12 Induktion von Autoantikörpern durch Immunsierung des humanen neo-La-Epitops
Bei einer Autoimmunpatientin konnte im Exon 7 des humanen La/SS-B-Gens in einer
hot spot-Region, in der die Mutationswahrscheinlichkeit stark erhöht war, eine Deletion eines
Adenin-Nukleotids festgestellt werden (BACHMANN et al., 1996a). Wahrscheinlich handelte es
sich um eine Punktmutation, die von der Patientin im Laufe ihres Lebens erworben wurde. Als
Folge dieser somatischen Mutation wurde nur das N-terminale Fragment des La/SS-B-Proteins
gebildet (BACHMANN et al., 1997). Jedoch wich die AS-Sequenz unterhalb der
Rasterschubmutation von der nativen AS-Sequenz ab, da, bedingt durch die Mutation, 12 neue
AS codiert wurden, die im nativen La/SS-B-Protein nicht vorkamen, bevor die Translation in
Folge eines neu entstandenen Stop-Codons unterbrochen wurde (BACHMANN et al., 1996b).
Diese 12 AS wurden im Folgenden mit neo-La bezeichnet. Das N-terminale Proteinfragment
des La/SS-B, an dessen C-terminalem Ende sich diese 12 AS befanden, wurde als La-N(7A)
benannt. Ein N-terminales Proteinfragment des La/SS-B ohne die 12 fremden AS wurde als
La-N(9A) bezeichnet.
Hypothetisch gesehen würde auch die Deletion eines Adenin-Nukleotids in der
hot spot-Region im Exon 7 des murinen La/SS-B-Gens zur Bildung von 12 fremden AS führen.
Diese 12 AS würden sich zwischen Mensch und Maus in nur drei AS (Abb. 32) unterscheiden.
Die neu entstandenen 12 AS stellten vermutlich ein Neoepitop dar. Nach der Hypothese
von LANZAVECCHIA (1995) könnten Neoepitope beim Durchbrechen von Toleranz, bei der
Entstehung von Autoimmunität und/oder dem triggern der Immunantwort beteiligt sein. Das
neo-La zeigte Homologie zur Topoisomerase I, zur RNA-Polymerasen, zur reversen
Transkriptase, zu einigen anderen DNA-bindenden Proteinen und zum nativen La/SS-B-Protein
selbst (BACHMANN et al., 1996a).
Daher sollte durch Immunisierung von Balb/c-Mäusen mit neo-La untersucht werden, ob
es möglich war, AK gegen das neo-La-Epitop zu induzieren. Des weiteren sollte überprüft
werden, ob die Immuntoleranz gegen körpereigenes La/SS-B-Protein durchbrochen werden
konnte und sich Autoantikörper gegen das endogene, murine La/SS-B-Protein nachweisen
ließen. Gleichzeitig sollte untersucht werden, gegen welche Domänen im La/SS-B-Protein
Autoantikörper gebildet wurden.