verzeichnisse - ArchiMeD - Johannes Gutenberg-Universität Mainz

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6 Diskussion
6.17 Die Lokalisation des Proteins
Bei La/SS-B-Protein-Immunfärbungen konnten homogene (NYMAN et al., 1986) oder
gesprenkelte Kernfärbungen (BACHMANN et al., 1990b; CHAN und TAN, 1987; BACHMANN
et al., 1986a) oder auch nukleoläre Färbungen (DENG et al., 1981) auftreten (1.5.10).
GRÖLZ und BACHMANN (1997e) transfizierten NIH-3T3-Zellen mit der klassischen
Exon 1-cDNA und den alternativen Exon 1’- bzw. Exon 1’’-cDNAs des humanen La/SS-B.
Zellen, die mit der klassischen Exon 1-La/SS-B-cDNA transfiziert wurden, zeigten eine nukleäre
La/SS-B-Protein-Lokalisation, während Zellen, transfiziert mit den alternativen Exon 1’- bzw.
Exon 1’’-La/SS-B-cDNAs, eine vermehrt zytoplasmatische Lokalisation aufwiesen. Bedachte
man, dass die alternativen Exon 1’-und Exon 1’’-cDNAs aus den PBLs einer pSS-Patientin
isoliert wurden, könnte den alternativen La/SS-B-Transkripten eine pathophysiologische
Bedeutung zukommen. Insgesamt gesehen führten pathophysiologische Faktoren, die bei
Patienten einen Krankheitsschub auslösten, zu einer Umverteilung des La/SS-B-Proteins, so
dass den ANA eine pathogene Funktion zukommen könnte. (PEEK et al., 1994; VENABLES
und BROOKES, 1992; BABOONIAN et al., 1989).
Auf der Grundlage dessen stellte sich die Frage, ob für das murine La/SS-B-Protein,
wenn es von einer der drei murinen La/SS-B-mRNA-Isoformen translatiert wird, ebenfalls eine
vermehrt zytoplasmatische Proteinlokalisiation festgestellt werden konnte, was auf eine
pathophysiologische Bedeutung der murinen alternativen mRNAs schließen lassen würde. Die
Untersuchung erfolgte durch transiente Transfektion und immunzytochemische
Fluoreszenzmikroskopie (5.6). Dabei konnte das La/SS-B-Protein immer nur mit der üblichen
nukleären Lokalisation nachgewiesen werden (Abb. 13). Trotz der Überexpression war keine
zytoplasmatische Färbung des La/SS-B-Proteins und somit keine Translokation detektierbar.
Somit stellte sich die Frage, ob den alternativen, murinen La/SS-B-mRNA-Isoformen überhaupt
eine pathophysiologische Bedeutung zugesprochen werden konnte. Nur die gewebespezifische
Expression der Exon 1b-mRNA-Form in proliferierenden Zellkulturen mit Tumorcharakter
könnte auf eine Pathophysiologie hindeuten (5.4 und 6.13).
C) Analyse des murinen La/SS-B auf Proteinebene
Die Untersuchung des murinen La/SS-B-Proteins erfolgte unter physiologischen und
pathophysiologischen Bedingungen. Zunächst sollten die Domänen und Strukturelemete des
murinen Proteins mit dem humanen verglichen werden. Des weiteren sollte festgestellt werden,
ob sich verschiedene isoelektrische Proteinformen nachweisen ließen und ob das murine
Protein, ähnlich dem humanen, eine hohe Ladungsheterogenität besaß.
Unter pathophysiologischen Bedingungen wurde der Einfluß des Moleküls
Stickstoffmonoxid auf das murine La/SS-B-Protein untersucht. Außerdem sollte mittels