verzeichnisse - ArchiMeD - Johannes Gutenberg-Universität Mainz

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Abwägung aller Faktoren wurde zur Expressionsanalyse der murinen
La/SS-B-mRNA-Isoformen die Methode der RT-PCR gewählt.
In allen untersuchten Mausgeweben, Mausembryonen, murinen Zellkulturen und
Primärzellen konnte die GAPDH-Kontrollbande detektiert werden (Abb. 8 und 9), was zeigte,
dass die Durchführung des Versuchs unter den gewählten Bedingungen möglich war. Ebenso
konnte überall die La/SS-B-Kontrollbande (Exon 2–11) nachgewiesen werden (Abb. 8 und 9),
was bedeutete, dass immer wenigstens eine La/SS-B-mRNA-Isoform exprimiert werden
musste, was der Beschreibung von La/SS-B als permanent exprimierendes Haushaltsgen
entsprach (1.5.1). Auch von TOPFER et al. (1993) konnte gezeigt werden, dass das
La/SS-B-Protein in vielen Mausgeweben exprimiert wurde, was auf eine ubiquitäre Expression
schließen ließ. Dabei blieb jedoch die Frage offen, welche mRNA-Isoform in welchem Gewebe
exprimiert wurde.
Die Exon 1a- und die Exon 1c-mRNA-Isoform des murinen La/SS-B wurden ebenfalls
von fast allen untersuchten Proben exprimiert (Abb. 8 und 9). Eine Ausnahme bildeten das
Leber- und Testisgewebe (Abb. 8). Bei Lebergewebe konnte mit allen Isoform-spezifischen
Primern kein PCR-Produkt erhalten werden (Abb. 8). Da aber der codierende Leserahmen des
La/SS-B amplifiziert werden konnte, konnte dies nicht auf eine gewebeabhängige Expression
hindeuten. Bei Testisgewebe konnte mit dem Primerpaar La-mRNA-F3 und La-mRNA-R1 (5.4)
keine Bande amplifiziert werden (Abb. 8). Wahrscheinlich wurde die PCR bei diesen Geweben
durch unbekannte Faktoren gestört.
Die zusätzliche Expression der Exon 1b-mRNA-Isoform konnte in keinem der
untersuchten murinen Geweben, Mausembryonen oder murinen Primärzellen, sondern nur in
Zellkulturen nachgewiesen werden, jedoch nur in solchen, die zum Zeitpunkt der
RNA-Präparation eine Konfluenz von weniger als 50% besaßen (NIH-3T3-Zellen,
Swiss-3T3-Zellen, P388D1-Makrophagen und Myelomzellen) oder im undifferenzierten
Entwicklungsstadium (PCC7-Mz1-Nervenzellen) vorlagen (Abb. 9). Die zusätzliche Expression
der Exon 1b-mRNA-Isoform bei NIH-3T3-Zellen (