Técnicas para la determinación de compuestos antioxidante en alimentos. – Laura Agudo Medina –ISSN: 1989-9041, Autodidacta ©Los antioxidantes pueden actuar:A. Previniendo la formación de ROS.B. Interceptando el ataque de ROS.C. Secuestrando los metabolitos reactivos y convirtiéndolos en moléculas menosreactivas.D. Facilitando la reparación del daño causado por ROS.E. Manteniendo un ambiente favorable para la actuación de otros antioxidantes.F. Amplificando la resistencia de las dianas biológicas sensibles al ataque de ROS.Según el modo de acción, los antioxidantes se clasifican en primarios, secundariosó terciarios: Primarios: Impiden la formación de radicales libres, frenan la reacción encadena de los radicales libres, especialmente de las especies reactivas del oxígeno(ROS) ó son quelantes de metales de transición. Se comportan como captadores deestos ROS. Secundarios: Interrumpen la reacción de propagación de los radicales libres ódesplazan las especies reactivas del oxígeno (ácido ascórbico, carotenoides, glutationy la mayoría de las enzimas antioxidantes). Terciarios: Reparan el daño causado a las moléculas por los radicales libres óeliminan aquéllas que se han estropeado.En el organismo humano los radicales libres están controlados mediante un amplioespectro de antioxidantes de origen endógeno (enzimas antioxidantes, glutatión,albúmina, transferrina, ácido úrico, bilirrubina) y exógenos a través de la dieta(vitamina E y C, carotenoides, selenio, compuestos fenólicos) (Gutteridge, 1995). Entrelos componentes del sistema antioxidante endógeno destacan las enzimasantioxidantes: catalasa, superóxido dismutasa (SOD) y glucosa fosfatodeshidrogenasa. La SOD es una enzima distribuida en todo el organismo. Hay dostipos intracelulares de SOD: la que está presente en la mitocondria, que contienemanganeso en su centro activo (Mn-SOD) y la del citosol, que tiene iones de cobre yzinc (Cu-Zn-SOD). La Catalasa es una enzima intracelular que se localiza en el interiorde los glóbulos rojos. El equilibrio entre la actividad de la Catalasa respecto de SOD esfundamental para mantener el balance REDOX. La GPx es un complejo enzimático,existen cuatro formas diferentes de esta enzima y todas ellas tienen selenio en sucentro activo (Holben DH y col., 1999).Cuando la agresión supera las defensas se habla de estrés oxidativo, es decir, elbalance oxidativo entre la producción de radicales libres y las defensas antioxidantesse rompe. Si esto ocurre las especies reactivas generadas pueden iniciar procesos28
Técnicas para la determinación de compuestos antioxidante en alimentos. – Laura Agudo Medina –ISSN: 1989-9041, Autodidacta ©patológicos graves como diabetes, cáncer, enfermedades cardiovasculares,envejecimiento.2.- BENEFICIOS QUE SE OBTIENEN DE UNA DIETA RICA EN POLIFENOLES.Son numerosos los estudios que han mostrado que los polifenoles poseenpropiedades antioxidantes, inhibiendo la peroxidación lipídica y captando radicaleslibres hidroxilo, supéroxido y alcoxi (Sichel et al., 1991). Protegen de la oxidación a laslipoproteínas de baja densidad (LDL) desempeñando un papel clave en la prevenciónde la aterosclerosis. También pueden prevenir la trombosis, inhibiendo la agregaciónplaquetaria, la permeabilidad y fragilidad capilar (Mazza, 2000). Son consideradosreguladores del sistema inmune y como antiinflamatorios, probablemente debido a lamodulación del metabolismo del ácido araquidónico, reduciendo los niveles detromboxano. Modulan la actividad enzimática de la ciclooxigenasa, lipoxigenasa,fosfolipasa A2, hialuronidasa, e inhiben la acción de la angiotensina convertasa,mieloperoxidasa (que produce el hipoclorito y otros prooxidantes) y xantinooxidasa(que produce los radicales superóxido). Hay que destacar el potencialanticarcinógeno, ya que pueden estimular el bombeo de ciertos agentes cancerígenoshacia el exterior de las células o bien activar a las enzimas de detoxificación (Mazza,2000).3.- EXTRACCIÓN DE COMPUESTOS ANTIOXIDANTES DE LOS ALIMENTOSLos compuestos antioxidantes de los alimentos se extraen con disolventes dediferentes polaridades de acuerdo con el carácter hidrofílico o lipofílico de loscompuestos que se desean evaluar. El disolvente más comúnmente utilizado en laobtención de extractos lipofílicos es el hexano. También se han utilizado el eterdietílico y cloruro de metileno entre otros. Para la extracción de compuestos concarácter hidrofílico se han utilizado metanol, etanol, mezclas de etanol/agua,acetona/agua y metanol/agua así como extracción en medio ácido (pH=2) conmetanol/agua, seguida de acetona/agua y agua/acetonitrilo en medio ácido, todos ellosensayados en diferentes proporciones. Recientemente se ha observado que el tipo dedisolvente y la polaridad puede afectar a la transferencia del electrón singlete y a la delátomo de hidrogeno, los cuales son esenciales en la medida de la capacidadantioxidante. Asimismo, la presencia de compuestos no antioxidantes (ciertosaminoácidos y ácidos uránicos) en los extractos ensayados, también pueden afectar aestos resultados. Esto sugiere que la comparación de resultados sea solo llevada acabo en muestras en las que se utiliza el mismo método y el mismo disolvente deextracción y que las sustancias interferentes deben ser comprobadas. (Pérez Jimenezy col, 2006).3.1. Técnicas para la determinación de la actividad antioxidanteLa determinación de la actividad antioxidante de los alimentos es importante parapredecir el potencial antioxidante in vitro de los mismos antes de ser ingeridos; asímismo, nos permite determinar la protección frente a la oxidación y el deterioro delalimento que disminuye su calidad y valor nutricional.29