I,nº9Fechadepublicación:4deMayo2012

Técnicas para la determinación de compuestos antioxidante en alimentos. – Laura Agudo Medina –ISSN: 1989-9041, Autodidacta ©Debido a que el potencial redox del Fe 3+ -TPTZ es comparable con el del ABTS sepueden analizar compuestos similares con ambos métodos aunque las condiciones de lareacción sean distintas. El mecanismo del FRAP es de transferencia de electrones, adiferencia de otros métodos donde se produce captura de radicales libres, según esto, elFRAP puede ser útil, en combinación con otros métodos, en la determinación de lacapacidad antioxidante de productos que contengan distintos tipos de antioxidantes.Preparación de reactivos:- Ácido clorhídrico (HCl) 40mM. Diluir 535 µl de HCl (37%) en 100 ml de agua destilada.- Solución TPTZ 10 mM. Pesar 0,0312 g del reactivo TPTZ y disolverlos en un matraz de 10ml con HCl 40 mM.- Solución FeCl 3 -6H 2 O 20 mM. Disolver 0,1352 g de FeCl 3 -6H2O en 25 ml de agua destilada.- Tampón acetato 0,3 mM pH 3,6. Para 250 ml, disolver 0,0061 g de acetato sódico (NaAc)en 200 ml de agua destilada. Ajustar el pH a 3,6 utilizando HCl 40mM, y completar hasta los250 con agua destilada.- Solución de trabajo diario FRAP: Esta solución de trabajo deberá de prepararse a diario.Mezclar 2,5 ml de solución TPTZ con 2,5 ml de solución FeCl3-6H2O 20 mM y 25 ml de tampónacetato. Esta preparación debe mantenerse durante todo el proceso en el baño a 37ºC. Recta de calibración con la disolución de TROLOX. La solución madre se preparadisolviendo 0,01g de Trolox en 5 ml de metanol y 5ml de agua destilada. A partir de estasolución se hacen diluciones que serán los distintos puntos de la recta, con unasconcentraciones de 79, 119, 159, 199, 239, 279, 319, 359 y 399 µM.3.1.3.- Método ORAC (Oxigen Radical Absorbance Capacity).El fundamento del método ORAC se basa en la habilidad que tienen loscompuestos antioxidantes para bloquear radicales libres por donación de un átomo dehidrógeno:X + AHXH + A ●En este método, el radical artificial AAPH (2,2’-Azobis-(2-aminopropano)-dihidrocloruro) oxida a la fluoresceína de forma que esta pierde su fluorescencia. Deesta forma, las sustancias antioxidantes presentes en el extracto obtenido a partir delalimento disminuirían dicha pérdida de fluorescencia.Preparación de soluciones Disolución reguladora de fosfato 75mM pH 7,4. Para 1000 ml, disolver 10,35 g deNaH 2 PO 4 , H 2 O en 800 ml de agua destilada. Ajustar el pH a 7,4 y completar hasta 1 litro. Solución de AAPH 300 mM. Para 10 ml, disolver 0,8136 g de dihidrocloruro de 2,2´azobis-2-amidinopropanoen 10 ml de disolución reguladora de fosfato 75 mM pH=7,4.32