Variedades Regionais e Agricultura Biológica - DRAP Centro

facto de as cultivares de macieira serem mantidas por propagação vegetativa, o seu
carácter monoclonal e o elevado número de cultivares que têm sido originadas por
mutação, indicam que a variação genética esperada a nível intra-cultivar e inter-cultivar
seja mínima. Face à enorme diversidade de variedades existentes, é fundamental a
realização de uma caracterização precisa tanto ao nível morfológico como genético
para o registo de variedades e consequente protecção relativa a direitos de propriedade
sobre novas cultivares. Os métodos tradicionais para caracterização e estabelecimento
da variabilidade genética baseiam-se em características morfológicas, fisiológicas
e agronómicas, muitas vezes pouco adequadas por estarem relacionadas com o
desenvolvimento ou influenciadas pela interacção genótipo X ambiente ou por práticas
agrícolas como selecção de porta-enxertos e tipo de podas. Além disso, os genes
associados com características fenotípicas são normalmente em número limitado e
representam uma parte restrita do genoma (Goulão et al., 2001).
Os marcadores moleculares proporcionam a oportunidade para a caracterização
genética que permite uma comparação directa de diferentes materiais genéticos
independentemente das influências do ambiente. Os marcadores de ADN são também
mais abundantes que os marcadores morfológicos e bioquímicos e permitem avaliar
todo o genoma. O ensaio RAPD (William et al., 1990) baseia-se na amplificação
aleatória de fragmentos de ADN por PCR (Polymerase Chain Reaction), através da
utilização de pequenos primers de sequência aleatória.
A sensibilidade dos métodos baseados no PCR é variável, com alguns primers
a revelarem padrões de fragmentos monomórficos e outros com elevados níveis de
polimorfismo. Os marcadores RAPD são usualmente transmitidos de forma dominante
e as relações alélicas entre pares de fragmentos apenas têm sido reportados em poucos
casos (Nybom, 1994). Contudo, a reduzida reprodutibilidade em diferentes condições
testadas, resultante de uma elevada sensibilidade a variações de condições no PCR,
torna difícil comparar resultados entre diferentes grupos de trabalho. A técnica de RAPD
é muito atractiva devido à sua simplicidade técnica, custo moderado e possibilidade de
gerar um elevado número de marcadores. Esta técnica revela ainda a vantagem de
prescindir do conhecimento prévio do genoma e de requerer uma reduzida quantidade de
ADN por análise. A utilização de primers de reduzidas dimensões e baixas temperaturas
de emparelhamento torna os marcadores RAPD extremamente sensíveis às condições
de reacção e irreproduzíveis em diferentes laboratórios (Goulão & Oliveira, 2001).
A identificação de cultivares pode ser conseguida de uma forma precisa a partir de
marcadores moleculares de ADN, especialmente em materiais caracterizados por elevados
níveis de variação genética entre cultivares e sem variação dentro de cada cultivar. Estes
exemplos são encontrados tipicamente, em cultivares propagadas vegetativamente,
derivadas de espécies provenientes de polinização cruzada (Nybom, 1994).
Estes marcadores têm sido utilizados em estudos de relações genéticas no género
Malus (Dunemann et al., 1994), para identificação de cultivares de macieira (Koller et
al., 1993; Mulcahy et al., 1993) e porta-enxertos de macieira (Autio et al., 1998) e para
análise de paternidade (Harada et al., 1993; Gardiner et al., 1996). Contudo, a análise
RAPD, revelou-se incapaz de descriminar entre cultivares sport e originais (Mulcahy et
al., 1993; Haranda et al., 1993).
O crescente desenvolvimento e a utilização generalizada de um largo número
de metodologias, durante os últimos anos, para identificar marcadores moleculares
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Capítulo 1 - Variedades regionais portuguesas