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DISKUSSION
Zell-Depletion zu verzeichnen war, zeigten die Tiere der Gruppen 7 und 8 eine
Unterdrückung der B-Zell-Depletion und stellenweise sogar eine Stimulation der B-
Zell-Proliferation nach CSFV-Infektion. Dieser positive Effekt ist vermutlich auf die
zusätzliche Stimulation der humoralen Immunantwort durch IL-18 [Yoshimoto,
1999/2000] und den CD40L [Banchereau, 1994/i; Foy, 1996] zurückzuführen.
Zusammenfassend kann somit festgestellt werden, dass mit der Konstruktion der
pcDNA4HisMax-E2-IL-18- bzw. pcDNA4HisMax-E2-CD40L-Plasmide die Herstel-
lung einer hochwirksamen CSFV-spezifischen DNA-Vakzine gelungen ist, die neben
der Induktion eines protektiven Schutzes auch die horizontale Ausbreitung des CSFV
bei Infektion verhindert.
Da exprimierte membranständige Proteine wie der CD40L oder das NS5B des HCV
aufgrund ihrer stark hydrophoben N- bzw. C-terminalen Struktur häufig Schwierig-
keiten bei der Solubilisierung zeigen [Berger, 2001], wurde für die molekulare
Charakterisierung des porcinen CD40L pQE-Konstrukte mit und ohne Signal-Anker-
Sequenz für die Expression in E.coli hergestellt. Mit dem Konstrukt ohne N-terminale
Signal-Anker-Sequenz konnten wie für den humanen CD40L beschrieben [Noelle,
1992] große Mengen des löslichen CD40L unter denaturierenden Bedingungen isoliert
werden. Für das vollständige Protein gelang es trotz Optimierungsversuchen und
affinitätschromatographischer Reinigung nicht, ein spezifisches Produkt
nachzuweisen, was vermutlich in der Unlöslichkeit des Proteins aufgrund der Signal-
Anker-Sequenz begründet liegt. Mit dem gereinigten Protein wurde anschließend ein
polyklonales Antiserum hergestellt, dessen Spezifität durch Western Blot-Analysen
und Vergleiche mit einem monoklonalen anti-human-CD40L-Antikörper gesichert
wurde. Die beobachtete Kreuzreaktion zwischen einem murinen monoklonalen anti-
human-CD40L-Antikörper und porcinem CD40L bestätigt die für Maus und Mensch
beschriebenen Sequenzhomologien zwischen den CD40L verschiedener Spezies
[Armitage, 1992; Noelle, 1992].
Für die Expression des CD40L in seiner nativen Form konnte eine stabile 293-CD40L
Zelllinie etabliert und deren Spezifität durch Oberflächenimmunfluoreszenz-, Western
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