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ERGEBNISSE
3.4.5.3 Herstellung einer stabilen 293-Zelllinie für porcines IL-12
In einem ersten Schritt erfolgte die Analyse der resistenten Zellklone wie schon für IL-
18 durch Western Blot und Radioimmunpräzipitation. Trotz erfolgreicher Transfektion
gelang mit keiner der verwendeten Methoden der Nachweis eines IL-12-spezifischen
Signals. Um zu klären, ob die von den resistenten Klonen möglicherweise produzierte
Menge an IL-12 unterhalb der Detektionsgrenze der verwendeten Methoden lag,
wurde ein hochsensitiver Aktivitätstest eingesetzt.
Dieser beruht auf der Aktivierung von PBMC durch IL-12, was zu einer starken
Stimulation der IFN-γ-Produktion führt. Diese Steigerung der IFN-γ-Produktion kann
anschließend in einem IFN-γ-ELISA überprüft werden. Deshalb wurden PBMC mit
Zellkulturüberständen resistenter Klone und nativer 293-Zellen versetzt, 18 h inkubiert
und die daraus gewonnenen Überstände für einen IFN-γ-ELISA eingesetzt. Zur
Überprüfung der IL-12-Spezifität einer möglichen stimulatorischen Reaktion wurden
PBMC gleichzeitig mit Zellkulturüberständen von resistenten Klonen und nativen 293-
Zellen versetzt, die zuvor über Nacht mit einem IL-12-spezifischen polyklonalen
Antiserum inkubiert wurden.
Die Daten zeigten eine starke Steigerung der IFN-γ-Ausschüttung nach Inkubation mit
Zellkulturüberstand von Klon 7 und gleichzeitig eine Aufhebung dieses Effektes bei
Inkubation mit einem IL-12-spezifischen polyklonalen Antiserum (Abb. 3-38). In dem
verwendeten Testsystem konnte also für Klon Nr. 7 ein IL-12-spezifischer
stimulatorischer Effekt auf die IFN-γ-Produktion nachgewiesen werden.
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