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ERGEBNISSE
Die in vitro Untersuchungen der Vakzine-Konstrukte erbrachten somit.
• den Nachweis der Proteinexpression sowohl für das E2-Glykoprotein als auch
für die Zytokine bzw. immunstimulatorischen Moleküle und
• keine signifikanten Unterschiede in der in vitro Expression zwischen
Konstrukten mit Transkriptionseinheiten heterodimerer (RSV/CMV-Promotor)
oder homodimerer (CMV/CMV-Promotor) Struktur.
Mit dem Abschluß der Expressionsuntersuchungen der Konstrukte in vitro waren die
nötigen Vorarbeiten erbracht, um die DNA-Vakzine-Vektoren im Tier zu analysieren.
3.3 Analyse der DNA-Vakzine-Konstrukte im Tierversuch
Vor einer Untersuchung der hergestellten Konstrukte im Tier mussten in einem ersten
Schritt die Parameter des wirtsspezifischen Testsystems optimiert werden. Ausgehend
von früheren Immunisierungsversuchen mit einer auf CSFV-spezifischem E2
basierenden DNA-Vakzine [Andrew, 2000] entschieden wir uns für ein klassisches
Immunisierungsschema. Dabei erfolgen nach der ersten Immunisierung im Abstand
von je 22 Tagen 2 weitere Immunisierungen. Nach weiteren 22 Tagen wird dann die
Wirksamkeit der Immunisierung durch eine experimentelle CSFV-Infektion überprüft.
3.3.1 Optimierung der Applikationsart und Belastungsinfektion
Nach Festlegung des Immunisierungsschemas musste die Impfdosis für die DNA-
Immunisierung bestimmt werden. Da die Wirksamkeit der E2-Vakzin-Vektoren im
Verhältnis zu den E2-IL-18-/IL-12-/CD40L-Vakzin-Vektoren untersucht werden
sollte, musste gewährleistet sein, dass eine gegebenenfalls schwache Schutzwirkung
durch die Vektoren selbst und nicht durch eine unzureichende DNA-Menge bedingt
ist. Daher wurde für jede Immunisierung 1 mg Plasmid-DNA eingesetzt. Um eine
möglichst praxisnahe und einfache Applikation der DNA-Vakzine zu erreichen und
die zu untersuchenden Parameter zu begrenzen, sollte auf die Applikation mittels
Panjet-Inokulator oder Gen–gun verzichtet und die DNA durch Injektion appliziert
werden. Die Frage, ob eine Injektion intramuskulär (i.m.) oder intradermal (i.d.)
erfolgt, ist von großer Bedeutung für die Schutzwirkung der DNA-Vakzine [Bohm,
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