PDF 5.972kB - TOBIAS-lib - Universität Tübingen

ERGEBNISSE
Da der gesamte cDNA-Bereich, also auch die Signal-Anker-Sequenz des porcinen
CD40L in die Expressionskassette inseriert wurde, war zu erwarten, dass nach
Expression eine Präsentation des CD40L auf der Zelloberfläche erfolgt. Daher wurde
eine Fixierung verwendet, bei der nur auf der Oberfläche der Zelle lokalisierte
Moleküle markiert wurden. In Abb. 3-9 sind die Ergebnisse dargestellt. Für beide E2-
CD40L-Konstrukte (pcDNA4HisMax-E2-CD40L- und pRC/RSV-E2-CD40L) konnte
eine Expression des porcinen CD40L auf der Zelloberfläche nachgewiesen werden,
während für die entsprechenden Negativkontrollen kein spezifisches Signale detektiert
wurde.
Eine durchgeführte Immunfluoreszenzanalyse mittels eines porcinen polyklonalen
CD40L-Antiserums (siehe 3.4.4) ergab erwartungsgemäß zu starke Hintergrundsignale
(Daten nicht gezeigt).
Abb. 3-9: CD40L-Expressionsanalyse der Konstrukte pcDNA4HisMax-E2-CD40L und
pRC/RSVE2-CD40L. Photographische Aufnahme der CD40L-Expression 24 h nach
Transfektion mit je 1µg der E2-CD40L-Konstrukte. Dabei verwendete man einen hCD40Lspezifischen
monoklonalen Maus-Antikörper als Primär- und einen Ziege-anti-Maus IgG,
DTAF-gekoppelten Antikörper als Sekundärantikörper. Zusätzlich wurden die Zellkerne der
Zellen mit Propidiumjodid (rot) angefäbt. Die jeweilige Konstruktbezeichung ist als Bildunterschrift
dargestellt. Als Negativkontrolle dienten MAX-Zellen, die mit einem Gemisch
des pcDNA4HisMax- und pRC/RSV-Plasmides transfiziert wurden.
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