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ERGEBNISSE 3.3.2 Vergleichende Analyse der unterschiedlichen E2-Vektorsysteme Nachdem die Rahmenbedingungen des Vakzine-Testes bestimmt waren, wurde im zweiten Schritt eine Vorauswahl der E2-Vakzine-Konstrukte (pRC/RSV-E2 oder pcDNA4HisMax-E2) anhand der E2-Schutzwirkung im Tierversuch getroffen. Außerdem sollten verschiedene Testsysteme zum “Monitoring“ der spezifischen Reaktion des Immunsystems etabliert bzw. auf ihre Verwendbarkeit hin analysiert werden. Daher wurden 13 Tiere, wie in Abb. 3-11 dargestellt, immunisiert und anschließend einer challenge-Infektion unterzogen (siehe 3.3.1). Gruppe Tiernummer Vektor 1 2 3 6 pRC/RSV 26 pRC/RSV 45 pcDNA4HisMax 46 pcDNA4HisMax 174 pcDNA4HisMax/ pRC/RSV 47 pcDNA4HisMax-E2 48 pcDNA4HisMax-E2 170 pcDNA4HisMax-E2 171 pcDNA4HisMax-E2 49 pRC/RSV-E2 50 pRC/RSV-E2 172 pRC/RSV-E2 173 pRC/RSV-E2 Abb. 3-11: Immunisierungsschema der Tiergruppen zur vergleichenden Analyse der E2- Vektorsysteme. Es sind die Tiergruppen, Tiernummern und die jeweils applizierten Vektoren dargestellt. 36
ERGEBNISSE Von den Tieren wurden wöchentlich PBMC und Serum gewonnen und mittels unterschiedlicher Testsysteme untersucht. Für die Erfassung der Schutzwirkung einer DNA-Vakzine sind neben dem Überleben und dem Allgemeinzustand des Tieres drei Hauptpunkte von Interesse: 1. die humorale Immunantwort, 2. die zelluläre Immunantwort und 3. die Virusvermehrung bzw. - verbreitung. 3.3.2.1 Analyse der induzierten CSFV-spezifischen humoralen Immunantwort • E2-spezifischer Antikörper ELISA Zur Erfassung der durch die Immunisierung induzierten E2-Antikörper wurde mit allen Seren ein E2-spezifischer Antikörper-ELISA durchgeführt. Dies sollte Auskunft geben, inwieweit die DNA-Vakzine-Vektoren allein eine CSFV-spezifische humorale Immunantwort induzieren können. In Abb. 3-12 sind die Ergebnisse zusammengefasst. Alle Tiere der Gruppe 1, die als Kontrolltiere dienten, verstarben acht bzw. neun Tage post challenge ohne dass CSFV-spezifische Antikörper nachgewiesen werden konnten. Für die Tiere der Gruppen 2 und 3 konnten hingegen sowohl vor als auch nach erfolgter Infektion E2-spezifische Antikörper detektiert werden. Allerdings waren nicht alle Tiere der Gruppe 3 (pRC/RSV-E2) vor der Infektion geschützt. Tier 49 und 50 verstarben bereits sieben bzw. acht Tage post challenge. Die besten E2- Antikörperwerte zeigten die Tiere der Gruppe 2 (pcDNA4HisMax-E2), von denen alle vor einer challenge-Infektion geschützt waren und sich rasch erholten. 37
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DISKUSSION Versuchsansätzen wurde
Seite 101 und 102:
DISKUSSION Zell-Depletion zu verzei
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DISKUSSION p35-Untereinheit zeigte
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5 MATERIAL MATERIAL 5.1 Bakterienst
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● Linker MATERIAL SmaI SV40 Hpa I
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MATERIAL Ziege-anti-Kanninchen IgG,
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5.8 Radioaktive Substanzen MATERIAL
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5.10.1 Zentrifugen MATERIAL Biofuge
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6.1.3 Transformation METHODEN Für
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Transfektionsmethoden METHODEN •
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METHODEN 12000 rpm). Nach den Extra
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METHODEN Reaktions“kugeln“ enth
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METHODEN peratur inkubiert. Nach Zu
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METHODEN konstante Geltemperatur vo
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METHODEN 6.5.2 RNA-Agarosegelelektr
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METHODEN 6.6.2 Diskontinuierliche S
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METHODEN Nitrozellulosemembran in 3
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METHODEN induzierbare Expression de
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METHODEN Reinheit und ihren Protein
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METHODEN ● Organe: Je 500 mg eine
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METHODEN stellt ein relatives Maß
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ANHANG 610 630 650 TCGGAGAGAATCTTAC
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LITERATUR Birnboim, H.C., Doly, J.
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LITERATUR Wei, W.Z., Shi, W.P., Gal
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