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DISKUSSION
E2-Poxvirus [Hahn, 2001], mit dem im Baculovirussystem exprimierten E2-
Glykoprotein selbst [van Rijn, 1996/1999; van Zijl, 1991] sowie einer E2-DNA-
Vakzine [Andrew, 2000] durchgeführt.
Bei der Etablierung der in dieser Arbeit untersuchten DNA-Vakzine wurde das Ziel
verfolgt, sowohl die endogen exprimierte Menge an E2 zu maximieren als auch eine
Steigerung der Immunreaktion durch die Expression zusätzlicher immun-
stimulatorischer Moleküle zu erreichen. Die exprimierte Proteinmenge ist u.a.
abhängig von dem verwendeten Promotor. Daher wurden, ausgehend von
Untersuchungen mit Reportergenen, eukaryotische Expressionsplasmide gewählt, die
die Promotoren des Humanen Cytomegalievirus (pcDNA4/HisMax) bzw. des Rous-
Sarkom-Virus (pRC/RSV) enthielten. Beide Promotoren sind in der Lage hohe
Expressionsraten der Reportergene zu induzieren [Zarrin, 1999; Manthorpe, 1993].
Die Wahl der Immunstimulatoren ist von einer Vielzahl von Faktoren wie z.B. der Art
der Erreger, dem Krankheitsverlauf und den wirtsspezifischen Besonderheiten des
Immunsystems abhängig. Daher kann das für die Erkrankung optimal
immunstimulatorische Molekül nur im Wirtssystem selbst bestimmt werden. Für die
Stimulation einer CSFV-spezifischen Immunantwort wurden IL-12 [Boretti, 2000;
Shan, 1999], IL-18 [Dupre, 2001] und der CD40L [Ihata, 1999] gewählt, die für
andere Erkrankungen bereits erfolgreich als Immunstimulatoren eingesetzt wurden.
Eine polycistronische Transkriptionseinheit zur Expression der heterodimeren
Molekülstruktur des porcinen IL-12 stand bereits durch vorangegangene Arbeiten
[Wienhold, 1998] zur Verfügung.
Die cDNA für porcines IL-18 und des CD40L mussten dagegen im Rahmen dieser
Arbeit mittels RT-PCR hergestellt werden. Die Bestätigung der Spezifität der Sequenz
für porcines IL-18 erfolgte durch Sequenzvergleich mit bereits beschriebenen
Sequenzen [Oem, 2000].
Obwohl die cDNA-Sequenz von porcinem CD40L bis dato nicht bekannt war, gelang
die Isolation eines spezifischen Produktes mit Hilfe von degenerierten-Primern mittels
RT-PCR. Der offene Leserahmen (ORF) des porcinen CD40L enthält 786 bp und
kodiert für ein 29kDa großes Protein. Sequenzvergleiche zwischen der isolierten
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