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ERGEBNISSE
3.1.2 Herstellung der E2-IL-18/IL-12/CD40L Vakzin-Vektoren
Die Steigerung der Effizienz einer DNA-Vakzine nach zusätzlicher Insertion von
Zytokinen und immunstimulatorischen Molekülen ist bereits für eine Reihe von
Erkrankungen beschrieben. Die Wahl der zusätzlich inserierten Zytokingene und Gene
anderer immunstimulatorischer Moleküle ist hauptsächlich vom Erreger und dem
Immunsystem des Wirtes abhängig. Daher mussten hinsichtlich der zu entwicklenden
CSFV-Vakzine verschiedene Moleküle ausgetestet und im Wirtstier analysiert werden.
Die bisher für verschiedene Erkrankungen durchgeführten Untersuchungen mit DNA-
Vakzinen favorisieren IL-12 [Boretti, 2000; Shan, 1999], IL-18 [Dupre, 2001] und den
CD40L [Ihata, 1999] aufgrund ihrer vielseitigen immunologischen Effekte als
“Adjuvantien“ zur Stimulation einer spezifischen Immunantwort. Daher sollten diese
drei Moleküle in die E2-Vakzine-Konstrukt inseriert werden. Die Gene für porcines
IL-18 und CD40L wurden hierfür aus PBMC isoliert.
3.1.2.1 Isolation der cDNA für porcines IL-18
Zur Isolation der cDNA für porcines IL-18 wurden zunächst PBMC (3x10 7 ) in Kultur
genommen und mit LPS (1,5µg/ml) stimuliert [Oem, 2000]. Anschließend wurde die
Gesamtzell-RNA isoliert und revers transkribiert. Die für die reverse Transkription
und die anschließende PCR verwendeten Primer (IL-18-vac.seq/rev) wurden in
Anlehnung an bereits veröffentliche Sequenzen für das porcine IL-18-Gen erstellt (Nr.
U68701). Es gelang, ein spezifisches Produkt zu isolieren und aufzureinigen (Abb. 3-
2). Nach Klonierung der PCR-Fragmente erfolgte deren Sequenzanalyse.
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