PDF 5.972kB - TOBIAS-lib - Universität Tübingen

Weitere Magazine

Empfehlungen

Info

ERGEBNISSE Immunstimulatoren lokalisierten, T7-Promotor enthielten, war eine Überprüfung der E2-Transkription für diese Konstrukte nicht möglich. Konstrukte Restriktionsverdau Erwartete RNA-Fragmente pcDNA4HisMax-E2-IL-12 Xho I, EcoR V E2: 1200 bp, IL-12 (p40-IRES): 1,8 kb pcDNA4HisMax-E2-IL-18 Xho I E2: 1200 bp, IL-18: 588 bp pcDNA4HisMax-E2-CD40L Xho I E2: 1200 bp, CD40L:790 bp pRC/RSV-E2-IL-12 BstB I IL-12: (p40-IRES): 1,8 kb pRC/RSV-E2-IL-18 BstB I IL-18: 640 bp pRC/RSV-E2-CD40L BstB I CD40L:840 bp Tab. 3-2: Übersicht des Linearisierungsschemas für die in vitro Transkription. Alle hergestellten Konstrukte wurden für eine Run-off-Transkription mit den angegebenen Restriktionsenzymen linearisiert. Außerdem ist die Länge erwarteten RNA-Fragmente in der Tabelle dargestellt. Für alle pcDNA4HisMax-Konstrukte konnte sowohl ein spezifisches Transkriptions- produkt für das E2-Glykoprotein als auch für die Zytokine bzw. immunstimulatorischen Moleküle nachgewiesen werden. Im Gegensatz dazu wurde für die pRC/RSVKonstrukte erwartungsgemäß ausschließlich ein spezifisches Transkriptions- signal für die Zytokine bzw. immunstimulatorischen Moleküle detektiert (Abb. 3-7). 26
ERGEBNISSE Abb. 3-7: Gelanalyse der pcDNA4HisMax- (A) und pRC/RSV- (B) T7-Transkriptionsansätze. Nach T7-Transkription wurde 1/10 der Transkriptionsansätze in einem denaturierenden 1%igen Agarose-Gel aufgetrennt. A, 1: pcDNA4HisMax-E2-IL-12- Konstrukt, 2: pcDNA4HisMax-E2-CD40L-Konstrukt, 3: pcDNA4HisMax-E2-IL-18- Konstrukt. B, 4: pRC/RSV-E2-IL-12-Konstrukt, 5: pRC/RSV-E2-CD40L-Konstrukt und 6: pRC/RSV-E2-IL-18-Konstrukt. Die spezifischen Signale sind am rechten Bildrand durch Pfeile markiert. Relevante Größen des RNA-Längenmarkers sind an der linken Seite bezeichnet. 3.2.2 E2-Expressionsanalyse mittels Immunfluoreszenz Um die Expression der Konstrukte in vitro zu überprüfen, sollten Zelllinien mit den Plasmiden transfiziert und die Expression mittels verschiedener Methoden analysiert werden. Da aufgrund der möglicherweise unterschiedlichen Transfektionseffizienz die Menge an detektierbarem spezifischen Protein bei transient transfizierten Zellen gering ist, wurde auf die Immunfluoreszenzanalyse zurückgegriffen, welche es erlaubt, die Expression auf Einzelzellniveau zu analysieren. Der hohe Hintergrund bei Einsatz polyklonaler Primärantikörper machte es allerdings erforderlich, einen monoklonalen Antiköper als Detektionsantikörper (Primärantikörper) einzusetzen. Als Zelllinie für die zellulären Expressionsversuche wurden MAX-Zellen [Pauly et al., 1995] gewählt, da sie als porcine Zelllinie das beste Wirtsmodell für die in vitro Versuche mit CSFV 27
Seite 1 und 2: DNA-Vakzinierung gegen classical sw
Seite 3: Die vorliegende Arbeit wurde unter
Seite 6 und 7: 3.3 Analyse der DNA-Vakzine-Konstru
Seite 8 und 9: 6.5 Präparation und Analyse von RN
Seite 11 und 12: ABKÜRZUNGEN 6xHis Hexahistidin Abb
Seite 13 und 14: 1 ZUSAMMENFASSUNG ZUSAMMENFASSUNG D
Seite 15 und 16: 2 EINLEITUNG 2.1 DNA-Immunisierung
Seite 17 und 18: EINLEITUNG Proben erforderlich) ein
Seite 19 und 20: EINLEITUNG Zellproliferation und Di
Seite 21 und 22: 2.3 Interleukin 18 2.3.1 Struktur E
Seite 23 und 24: 2.4 CD40-Ligand 2.4.1 Struktur EINL
Seite 25 und 26: EINLEITUNG 2.5.2 Genomorganisation
Seite 27 und 28: 3 ERGEBNISSE 3.1 Konstruktherstellu
Seite 29 und 30: ERGEBNISSE 3.1.2 Herstellung der E2
Seite 31 und 32: ERGEBNISSE Abb. 3-3: RT-PCR für di
Seite 33 und 34: ERGEBNISSE Abb. 3-4: Konstruktion d
Seite 35 und 36: ERGEBNISSE Zur Entnahme der komplet
Seite 37: ERGEBNISSE Nach Abschluß der Konst
Seite 41 und 42: ERGEBNISSE Abb. 3-8: E2-Expressions
Seite 43 und 44: ERGEBNISSE 3.2.4 Nachweis der IL-18
Seite 45 und 46: %spezifische Lyse %spezifische Lyse
Seite 47 und 48: ERGEBNISSE 1998; Smooker, 1999]. De
Seite 49 und 50: ERGEBNISSE Von den Tieren wurden w
Seite 51 und 52: • Serumneutralisationstest ERGEBN
Seite 53 und 54: ERGEBNISSE • IgG1/IgG2-isotypspez
Seite 55 und 56: ERGEBNISSE • IFN-γ-ELISA und IFN
Seite 57 und 58: ERGEBNISSE Deshalb wurde im dritten
Seite 59 und 60: ERGEBNISSE Vergleich der Tiere der
Seite 61 und 62: ERGEBNISSE Konstrukte. Daher wurden
Seite 63 und 64: ERGEBNISSE Antikörpertiter vor -un
Seite 65 und 66: ERGEBNISSE 3.3.3.2 Klinischer Verla
Seite 67 und 68: Temperatur 42 41,5 41 40,5 40 39,5
Seite 69 und 70: ERGEBNISSE Gruppe Tier-Nr. 4. Tag 7
Seite 71 und 72: ERGEBNISSE Antikörper und virusfre
Seite 73 und 74: ERGEBNISSE mehrerer anderer Zellfra
Seite 75 und 76: ERGEBNISSE Nach Transformation von
Seite 77 und 78: ERGEBNISSE Abb. 3-27: Klonierungssc
Seite 79 und 80: ERGEBNISSE 3.4.2.2 Expression der p
Seite 81 und 82: ERGEBNISSE Aufgrund der geringen Au
Seite 83 und 84: ERGEBNISSE CD40L (Abb. 3-35 A) spez
Seite 85 und 86: ERGEBNISSE Abb. 3-36: Analyse resis
Seite 87 und 88: ERGEBNISSE Abb. 3-37: Analyse der I
Seite 89 und 90:
1,8 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0
Seite 91 und 92:
ERGEBNISSE Abb. 3-40: E2-Expression
Seite 93 und 94:
DISKUSSION E2-Poxvirus [Hahn, 2001]
Seite 95 und 96:
DISKUSSION Der Nachweis der sekreti
Seite 97 und 98:
DISKUSSION Testsystemen nach erfolg
Seite 99 und 100:
DISKUSSION Versuchsansätzen wurde
Seite 101 und 102:
DISKUSSION Zell-Depletion zu verzei
Seite 103 und 104:
DISKUSSION p35-Untereinheit zeigte
Seite 105 und 106:
5 MATERIAL MATERIAL 5.1 Bakterienst
Seite 107 und 108:
● Linker MATERIAL SmaI SV40 Hpa I
Seite 109 und 110:
MATERIAL Ziege-anti-Kanninchen IgG,
Seite 111 und 112:
5.8 Radioaktive Substanzen MATERIAL
Seite 113 und 114:
5.10.1 Zentrifugen MATERIAL Biofuge
Seite 115 und 116:
6.1.3 Transformation METHODEN Für
Seite 117 und 118:
Transfektionsmethoden METHODEN •
Seite 119 und 120:
METHODEN 12000 rpm). Nach den Extra
Seite 121 und 122:
METHODEN 6.4.5 Abdau überhängende
Seite 123 und 124:
METHODEN Reaktions“kugeln“ enth
Seite 125 und 126:
METHODEN peratur inkubiert. Nach Zu
Seite 127 und 128:
METHODEN konstante Geltemperatur vo
Seite 129 und 130:
METHODEN 6.5.2 RNA-Agarosegelelektr
Seite 131 und 132:
METHODEN 6.6.2 Diskontinuierliche S
Seite 133 und 134:
METHODEN Nitrozellulosemembran in 3
Seite 135 und 136:
METHODEN induzierbare Expression de
Seite 137 und 138:
METHODEN Reinheit und ihren Protein
Seite 139 und 140:
METHODEN ● Organe: Je 500 mg eine
Seite 141 und 142:
METHODEN 6.12.2.3 Nachweis der IL-1
Seite 143 und 144:
6.12.3.4 Serumneutralisationstest M
Seite 145 und 146:
METHODEN stellt ein relatives Maß
Seite 147 und 148:
ANHANG 610 630 650 TCGGAGAGAATCTTAC
Seite 149 und 150:
LITERATUR Birnboim, H.C., Doly, J.
Seite 151 und 152:
LITERATUR D´Andreas, A., Rengaraju
Seite 153 und 154:
LITERATUR Gately, M.K., Warrier, R.
Seite 155 und 156:
LITERATUR Harkness, J. W. & Roeder,
Seite 157 und 158:
LITERATUR Kobayashi, M., Fitz, L.,
Seite 159 und 160:
LITERATUR Makoff, A.J., Oxer, M.D.,
Seite 161 und 162:
LITERATUR Nobiron, I., Thompson, I.
Seite 163 und 164:
LITERATUR Ruiz, P.J., Garren, H., R
Seite 165 und 166:
LITERATUR Sypek, J.P., Chung, C.L.,
Seite 167 und 168:
LITERATUR Wei, W.Z., Shi, W.P., Gal
Seite 169:
Persönliche Daten Name: Daniel Wie
Alle anzeigen

PDF 5.972kB - TOBIAS-lib - Universität Tübingen

Sie wollen auch ein ePaper? Erhöhen Sie die Reichweite Ihrer Titel.

Template löschen?

Als Template speichern?