PDF 5.972kB - TOBIAS-lib - Universität Tübingen

3.3 Analyse der DNA-Vakzine-Konstrukte im Tierversuch 34
3.3.1 Optimierung der Applikationsart und Belastungsinfektion 34
3.3.2 Vergleichende Analyse der unterschiedlichen E2-Vektorsysteme 36
3.3.2.1 Analyse der induzierten CSFV-spezifischen humoralen Immunantwort 37
3.3.2.2 Analyse der induzierten CSFV-spezifischen zellulären Immunantwort 42
3.3.2.3 Klinischer Verlauf und Virämie 45
3.3.3 Vergleichende Analyse der E2-IL-18/ IL-12/ CD40L Vektorsysteme 49
3.3.3.1 Analyse der induzierten CSFV-spezifischen humoralen Immunantwort 50
3.3.3.2 Klinischer Verlauf und Virämie 53
3.4 Darstellung von porcinem IL-12, IL-18 und dem CD40L im pro- und
eukaryontischen System 61
3.4.1 Prokaryontische Expression und Reinigung des porcinen CD40L 61
3.4.2 Prokaryontische Expression und Reinigung von porcinem IL-12 64
3.4.2.1 Expression der p40-Untereinheit des IL-12 64
3.4.2.2 Expression der p35 Untereinheit des IL-12 67
3.4.3 Prokaryontische Expression und Reinigung von porcinem IL-18 69
3.4.4 Gewinnung spezifischer polyklonaler Antiseren für porcines IL-18 und den CD40L
70
3.4.5 Eukaryontische Expression von porcinem CD40L, IL-18 und IL-12 72
3.4.5.1 Herstellung einer stabilen 293-Zelllinie für porcinen CD40L 72
3.4.5.2 Herstellung einer stabilen 293-Zelllinie für porcines IL-18 74
3.4.5.3 Herstellung einer stabilen 293-Zelllinie für porcines IL-12 76
3.5 Darstellung des E2-Glykoproteins im prokaryontischen System 77
4 DISKUSSION 80
5 MATERIAL 93
5.1 Bakterienstämme, Zelllinien und Virusisolate 93
5.2 Zellkulturmedien 93
5.3 Plasmide und Nukleinsäuren 93
5.3.1 Plasmide 93
5.3.2 Nukleinsäuren 93
5.4 Oligonukleotide 94
5.5 Enzyme und Kits 95
5.5.1 Enzyme 95
5.5.2 Kits 96
5.6 Antiseren und Antikörper 96
5.7 Chemikalien und Reagenzien 97
5.8 Radioaktive Substanzen 99