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DISKUSSION
Der Nachweis der sekretierten Zytokine IL-12 und IL-18 erfolgte durch einen
funktionellen NK-Assay, da sich durch die geringe Proteinmenge bei transienter
Transfektion und dem großen Verdünnungseffekt im Medium andere
Detektionsmethoden (z.B. Western Blot) als schwierig erwiesen. Durch den
funktionellen Test konnte eine 35%ige Steigerung der cytolytischen Aktivität für die
IL-12- bzw. eine 25%ige Steigerung der cytolytischen Aktivität für die IL-18-
Konstrukte im Verhältnis zu der Aktivität der E2-Grundkonstrukte festgestellt werden.
Der für die IL-12-Plasmide als Positivkontrolle verwendete Überstand von mit
rekombinanten porcinen IL-12-Adenoviren infizierten Zellen zeigte annähernd gleiche
stimulatorische Wirkung wie die Überstände der mit den E2-IL-12-Konstrukten
transfizierten Zellen. Die Steigerung der cytolytischen Aktivität korrelliert mit Daten,
die von Paul et al., 2000 für rekombinante Adenoviren mit murinem IL-12 bzw. für
exogene IL-18-Applikation von Kanda et al., 2000 beschrieben wurden.
Die weiteren durchgeführten in vitro Untersuchungen zur Effektivität der
homodimeren (CMV/CMV) bzw. heterodimeren (RSV/CMV) Transkriptionseinheiten
zeigten keine signifikanten Unterschiede im Verhältnis des exprimierten E2-
Glykoproteins zu den immunstimulatorischen Molekülen.
Die Abhängigkeit einer protektiven Schutzwirkung von der Applikationsart und dem
jeweiligen Erreger ist seit Jahren bekannt [Wolff, 1992; Böhm, 1998; Maloy, 2001;
Smooker, 1999]. Auf Grund der hohen Variabilität von Erregern mit RNA-Genom und
der damit verbundenen spezifischen Stimulation einer protektiven Immunantwort
konnte bisher eine einheitliche optimale Applikationsmethode nicht gefunden werden.
Daher wurde in ersten in vivo Versuchen im Schwein die Höhe der gewählten
challenge-Dosis [Meyers, 1999] sowie die Applikationsart optimiert. Dabei zeigte
sich, wie auch für andere DNA-Vakzine-Versuche beschrieben [Böhm, 1998], dass ein
Schutz durch eine intramuskuläre Injektion induziert wird, während andere
Immunisierungsarten nur zur Ausbildung einer unvollständigen Immunantwort
führten.
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