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2 EINLEITUNG
2.1 DNA-Immunisierung
EINLEITUNG
Seit ihrer Entdeckung im Jahre 1982 [Will, 1982] wird die Anwendbarkeit der DNA-
Immunisierung zur Bekämpfung verschiedenster Erkrankungen analysiert und
kontrovers diskutiert. Dabei umfasst das mögliche Einsatzspektrum u.a. bakterielle,
virale und parasitäre Erkrankungen. Des weiteren wird eine Anwendung von DNA-
Vakzinen für Tumor-, Autoimmun- und Allergietherapien untersucht.
2.1.1 Methode
Bei der DNA-Vakzinierung erfolgt die Immunisierung nicht wie bei herkömmlichen
Vakzinen durch ein exogen zugeführtes Antigen, sondern durch Applikation eines
eukaryontischen Expressionsvektors, wodurch nach Aufnahme der DNA in die Zelle
eine endogene Proteinexpression mit anschließender Antigenpräsentation erfolgt.
Die Gene der zur Immunisierung eingesetzten Proteine werden in eukaryontische
Expressionsvektoren kloniert und stehen dort unter der Kontrolle starker viraler
Promotoren. Obwohl es eine Vielzahl von möglichen Promotoren gibt, sind die am
häufigsten in den Vakzine-Vektoren eingesetzten Promotoren der des Humanen
Cytomegalievirus (CMV) und des Rous-Sarkom-Virus (RSV). Beide Promotoren
zeigten im Vergleich zu anderen bei Testansätzen mit einem Luciferase-Reportergen
die höchsten Expressionswerte [Manthorpe, 1993]. Für die Konstruktion polyvalenter
DNA-Vakzinen oder DNA-Vakzinen mit Adjuvants-Effekt ist es notwendig Vektoren
zu konstruieren, die eine Coexpression verschiedener Antigene oder eines Antigen–
Zytokin-Gemisches ermöglichen.
Der einfachste Weg besteht in der Koinjektion von unterschiedlichen Expressions-
plasmiden [Operschall, 2000]. Eine andere Möglichkeit ist die Herstellung eines
Fusionsproteins, sei es als Polyepitop- [Thomson, 1996], Antigen-Ligand- [Boyle,
1998] oder Antigen-Zytokin-Vakzine [Kim, 1997; Maecker, 1997]. Die verbreitetste
Methode besteht jedoch in der Konstruktion von Plasmiden mit mehreren
unabhängigen Transkriptionseinheiten [Sin, 1999; Lu, 1999; Larsen 1998]. Für die
Koexpression der Untereinheiten heterodimerer Moleküle (z.B. IL-12) ist die
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