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Dans le but d'expliquer comment ces modifications biochimiques sont en relation
avec des altérations structurales des cellules Caco-2 en culture, nous avons étudié la
présence de la catalase dans les peroxysomes par immunocytochimie ultrastructurale (figure
27). Aucune réaction positive n'est détectée dans les cellules Caco-2 à 5 jours de culture. Un
marquage apparaît faiblement au sein de peroxysomes peu nombreux à 10 jours de culture.
La fréquence de ces organites augmente entre 10 et 15 jours de culture. Les peroxysomes
présentent différents profils: ronds, ovales ou allongés.
II. ANALYSE TRADUCTIONNELLE DES PPAR AU COURS DE LA
DIFFERENCIATION DES CELLULES Caco-2
a. Choix des techniques
Nous avons étudié les taux protéiques des PPAR dans les cellules Caco-2 à 5, 10 et
15 jours de culture par immunoréplique grâce aux anticorps polyclonaux préparés au
Laboratoire et dirigés spécifiquement contre les différentes isoformes PPARa, PPARy et
PPARy2. La localisation des PPAR au cours de la différenciation spontanée des cellules
Caco-2 cultivées pendant 5, 10 et 15 jours est également étudiée par immunocytochimie
grâce à ces anticorps polyclonaux anti-PPARa et anti-PPARy préparés au Laboratoire et
anti-PPARy provenant du commerce (AB Reagent). Le montage utilisé pour mettre en
évidence in situ les PPAR fait appel au complexe streptavidine-biotine (figure 17C). Nous
avons utilisé un anticorps secondaire biotinylé dirigé contre l'anticorps primaire puis un
complexe streptavidine couplé à la peroxydase. La révélation se fait grâce à une solution
commerciale (Novared, BioValley).
b. Résultats
Expression de PPARa dans les cellules Caco-2
Par immunoréplique, une bande majoritaire de 52 kDa correspondant à PPARa est
révélée à partir des homogénats cellulaires. Son intensité augmente de 1,9 fois entre 5 et 15
jours de culture (figure 28A).
Par immunocytochimie, quelques noyaux des cellules Caco-2 sont marqués lorsque
l'anticorps anti-PPARa préparé au Laboratoire est utilisé (figure 29A-C et tableau 8). Une
immunoréactivité est aussi observée dans le cytoplasme. L'intensité du signal augmente à
10 jours, mais elle est plus prononcée à 15 jours de culture. A ce stade, le signal devient
majoritairement nucléaire, même si quelques signaux persistent dans le cytoplasme. Aucun
signal n'est observé lorsque l'anticorps primaire est remplacé par le sérum préimmun. De
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