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migration électrophorétique. La quantification du taux des ARNm de PPAR')'2 a été effectuée
sur le fragment de 282 pb. La diminution observée entre 5 et 15 jours de culture n'est pas
significative (figure 37).
Par RT-PCR semi-nichée, l'amplification de PPAR')'2 produit un fragment unique de
282 pb. Nous observons un pic d'expression à 10 jours (tableau 10). Cependant, le taux des
transcrits diminue, mais reste élevé à 15 jours. L'intensité du signal pour PPAR')'2 augmente
de 2 fois entre 5 et 15 jours de culture.
• PPARy3
Les taux des ARNm de PPARy3 sont analysés par la technique de protection à la
nucléase 81 et par RT-PCR semi-nichée à partir des ARN totaux extraits des cellules
Caco-2 à 5, 10 et 15 jours de culture.
Par la technique de protection à la nucléase 81, la sonde ADNc spécifique de
PPARy3 reconnaît 3 transcrits de 222, 146 et 76 pb (figure 36C). Le transcrit mature a une
taille de 222 pb et correspond à l'exon A2 et à une partie de l'exon E1. Les transcrits de 146
et 76 pb correspondent aux transcrits non matures de PPARy3. 8eulle fragment de 146 pb
est observable, le fragment de 76 pb étant élué du gel durant la migration électrophorétique.
Le taux des ARNm de PPARy3 augmente significativement de 2 fois entre 5 et 15 jours de
culture (figure 37). La mesure est réalisée sur le fragment mature de 222 pb.
Par RT-PCR semi-nichée, l'amplification de PPARy3 produit un fragment unique de
222 pb. L'augmentation du signal ne semble pas être significative (tableau 10).
v. DISCUSSION
a. La différenciation des cellules Caco-2 est accompagnée d'altérations
peroxysomiques.
Comme nous l'avons dit précédemment, la lignée cellulaire Caco-2 se différencie
spontanément en entérocytes au cours de la culture [258]. Les cellules sont indifférenciées
au début de la culture, puis entrent dans une phase exponentielle de croissance et après
confluence, elles se différencient en entérocytes. Cette différenciation est complète après 20
jours de culture [258, 281]. Dans la phase tardive de la culture, les cellules forment une
monocouche et présentent une bordure en brosse typique. Les protéines impliquées dans le
développement de la bordure en brosse lors de la différenciation des cellules Caco-2 ont été
identifiées [275, 281, 389], mais aucune étude n'a été consacrée aux relations entre cette
différenciation cellulaire et le comportement des peroxysomes. Les résultats montrent que
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