Ce document numérisé est le fruit d'un long travail approuvé par le ...

More documents

Recommendations

Info

dans cette technique ont été sélectionnées de sorte que le fragment généré soit spécifique de chaque isotype de PPAR et de chaque isoforme de PPARy (PPARy1, y2 et y3) (Tableau 2). Les amorces PPARa-sens (5'-gCC CAg gCT gAA gCT CAg gg-3') et PPARa-antisens (5'-gAC ACg gAA AgC CAC TCT gC- 3') sont choisies afin d'obtenir une séquence ADNc spécifique de hPPARa correspondant à la partie 5'UTR de la séquence décrite par Sher et al. [303]. Le fragment amplifié (244 pb) est purifié grâce à une trousse commerciale de purification d'ADN (Bio Rad) selon les instructions du fournisseur. Ce fragment ADNc est cloné dans un vecteur de clonage pBluescript KS+ (pBSKS+) (Stratagène, La Jolla, CA, USA) rendu préalablement linéaire après digestion pendant 2 heures à 25°C par l'enzyme de restriction Sma 1 (Invitrogen). L'efficacité du clonage est vérifiée par séquençage selon la méthode décrite par Sanger et al. [288]. Les plasmides pBSKS+/hPPARy1, pBSKS+/hPPARy2, pBSKS+/hPPARy3 et pBSKS+/G3PDH sont obtenus selon la même méthode: l'amorce PPARy1-sens située dans l'exon A1 (5'-TCg gAC CCC gAg CCC gAg-3'), l'amorce PPARy2 sens située dans l'exon B (5' CCC ATC TCT CCC AAA TAT TT-3') et l'amorce PPARy1/y2 antisens située dans l'exon E1 (5'-CAC AgA gAT CgC ATT Cgg CCC- 3) ont été sélectionnées à partir de la séquence ADNc décrite par Fajas et al. [83] (figure 19). Les couples d'amorces PPAR(y1 - y1/y2) et PPAR(y2 y1/y2) produisent respectivement un fragment de 131 pb spécifique de hPPARy1 et de 277 pb spécifique de hPPARy2. L'amorce PPARy3-sens située dans l'exon A2 (5'-gAA AgA AgC CgA CAC TAA ACC AC- 3') et l'amorce PPARy3-antisens située dans l'exon E1 (5' -ACA CCT CAT CTT TAC gAC CTC TTC- 3') ont été choisies d'après la séquence de Fajas et al. [84] et elles génèrent un fragment de 218 pb. L'amorce glyceraldéhyde-3 phosphate déshydrogénase (G3PDH) sens (5'-CCC ATC ACC ATC TTC CgA- 3') et G3PDH anti-sens (5'-ggA AAC TgT ggC CTg TAg- 3') issues de la séquence ADNc décrite par Tso et al. [347] produisent un fragment de 382 pb. Chaque fragment obtenu est cloné dans le vecteur de clonage pBSKS+ afin d'obtenir les plasmides pBSKS+/hPPARy1, pBSKS+/hPPARy2, pBSKS+/hPPARy3 et pBSKS+/G3PDH. pBSKS+/G3PDH est utilisé en tant que témoin interne de nos expériences. Marquage au [ 32 PJ-dCTP des sondes spécifiques de chaque hPPAR Chaque plasmide est linéarisé par une enzyme de restriction, EcoRI ou BamH1 (Promega, Madison, WI, USA) (3 à 5 unités d'enzyme/lJg d'ADN) agissent pendant 2 heures à 37°C. Le choix de l'enzyme dépend de l'orientation du fragment ADNc cloné dans le vecteur 65
Amorces sens Amorces antisens Références (5' vers 3') (5' vers 3') PPARa GCCCAGGCTGAAGCTCAGGG GACACGGAAAGCCACTCTGC [315] PPARyl TCGGACCCCGAGCCCGAG CACAGAGATCGCATTTCGGCCC [85] PPARy2 CCCATCTCTCCCAAATATTT CACAGAGATCGCATTTCGGCCC [85] PPARy3 GAAAGAAGCCGACACTAAACCAC CCTCATCTTTACGACCTCTTC [86] G3PDH CCCATCACCATCTTCCGA GGAAACTGTGGCCTGTAG [360] Tableau 2 : Couples d'amorces retenus pour la mise en œuvre de la technique de protection à la nucléase S1
Page 1 and 2:
AVERTISSEMENT Ce document numéris
Page 3 and 4:
Je remercie chaleureusement Monsieu
Page 5 and 6:
VIII. ROLES DES PPAR DANS CERTAINES
Page 7 and 8:
EXPRESSION DES PPAR AU NIVEAU DE LA
Page 9 and 10:
A mon père, A mon beau-père,
Page 11 and 12:
AINS : non steroid anti inflammator
Page 13 and 14:
Les récepteurs activés par les pr
Page 15 and 16:
CARACTERES GENERAUX SUR LE COLON F
Page 17 and 18:
Se SEMAINE COUPE SAGnTAtB /' Ile SE
Page 19 and 20:
allg le colique droit colon transve
Page 21 and 22:
œlltllê ~Uc:iforme ' Figure 4 : S
Page 23 and 24:
des glandes tubulaires. Les espaces
Page 25 and 26:
La voie de transduction Wnt/Wingles
Page 27 and 28:
l'homologue de TCF chez la Drosophi
Page 29 and 30:
conduisent à des tumeurs desmoïde
Page 31 and 32:
. facteurs transcriptionnels interv
Page 33 and 34:
LES RECEPTEURS ACTIVES PAR LES PROL
Page 35 and 36:
- un domaine E qui intervient dans
Page 37 and 38:
III. DISTRIBUTION TISSULAIRE DES PP
Page 39 and 40:
hétérodimères PPARlRXR se lient
Page 41 and 42: iW! 1341Oj)§ 16"q~xy,.'\12:,14 prO
Page 43 and 44: facteur de croissance par la voie M
Page 45 and 46: VI. INTERVENTION DES PPAR DANS LA D
Page 47 and 48: les fonctions endothéliales. Et-1
Page 49 and 50: c. PPAR et autres processus néopla
Page 51 and 52: CANCERS DU COLON ET PPAR 1. LES CAN
Page 53 and 54: Le terme de tubuleux est employé l
Page 55 and 56: musculeuse qui peut être dépassé
Page 57 and 58: La stadification tumoraux Le degré
Page 59 and 60: ganglions régionaux envahis. Leur
Page 61 and 62: éséquées dans le même temps op
Page 63 and 64: tumorale. Si les cancers colorectau
Page 65 and 66: colorectaux chez le rat ou la souri
Page 67 and 68: PPAR ~/û est également impliqué
Page 69 and 70: Les PPAR sont présents dans le col
Page 71 and 72: MATERIELS ET METHODES 1. MODELES BI
Page 73 and 74: puis retourné à l'aide d'une fine
Page 75 and 76: Dosage de l'activité de l'acyl GoA
Page 77 and 78: tlJ e SSGSFGFTEVQV T D 2" EIF 4]' P
Page 79 and 80: kDa A B -. - - ....... 94- 64- 43-
Page 81 and 82: MONTAGES LEGENDES • • antigène
Page 83 and 84: ensuite contre-colorée à l'hémat
Page 85 and 86: La révélation des complexes antig
Page 87 and 88: les cellules Caco-2 sont lysées en
Page 89 and 90: solution d'acétate de sodium 0,5 M
Page 91: ARN Sondes radioactives / hybridati
Page 95 and 96: pBSKS+. pBSK+/hPPARa, PBSKS+/hPPARy
Page 97 and 98: étudiée (figure 20). Nous avons r
Page 99 and 100: PPARa PPARB Amorces sens (5' vers 3
Page 101 and 102: Taq 1 coupe uniquement le fragment
Page 103 and 104: PCR semi-quantitative Une technique
Page 105 and 106: Amorces sens Amorces anti-sens Réf
Page 107 and 108: EXPRESSION DES PPAR AU COURS DU DEV
Page 109 and 110: Figure 21 : Etude par immunocytochi
Page 111 and 112: Figure 22: Etude par immunocytochim
Page 113 and 114: Figure 23: Etude par immunocytochim
Page 115 and 116: @ 12345678 404 pb- +-G3PDH 242 pb-
Page 117 and 118: Au niveau de l'intestin, quel que s
Page 119 and 120: Enzymes Activités spécifiques 5 j
Page 121 and 122: @ Q) "0 Cti:l- .n 115 ~ ~ ~.~ CIl .
Page 123 and 124: Figure 27 : Mise en évidence de l'
Page 125 and 126: PPARa PPARy PPARy (commerciale) Fig
Page 127 and 128: même, lorsque l'anticorps primaire
Page 129 and 130: Caco-2 5 10 15 TA IR --288 -188 Fig
Page 131 and 132: COX-1 COX-1 Caco-2 Caco-2 intestin
Page 133 and 134: o ~- caténine Caco-2 !Tissu adipeu
Page 135 and 136: ARN totaux ARN Poly A+ PPARy 51015
Page 137 and 138: û) cr: ~ « .- ll.. ~ ll.. .~ .0 Q
Page 139 and 140: RT-PCR Caco-2 (jours de culture) Co
Page 141 and 142: migration électrophorétique. La q
Page 143 and 144:
l'activité enzymatique de AOX et c
Page 145 and 146:
RT-PCR HT29 (jours de culture) comp
Page 147 and 148:
La protéine PPARy1, contribuent en
Page 149 and 150:
Caco-2 ft , t. "l PPARy cytochrome
Page 151 and 152:
EXPRESSION DES PPAR AU NIVEAU D'ADE
Page 153 and 154:
Nombre de cas (%) SEXE Homme Femme
Page 155 and 156:
Tissu sain Tumeur Témoin (grandiss
Page 157 and 158:
témoin PPARy Figure 42 : Mise en
Page 159 and 160:
patients 99/5984 N T 99/5027 N T 98
Page 161 and 162:
ANALYSE GENERALE PPARa 2,82 0,005 S
Page 163 and 164:
Paramètres PPAR Cf. PPAR ~ PPARy C
Page 165 and 166:
STADES 1et 1/ PPARa 2,23 0,02 S PPA
Page 167 and 168:
III. DISCUSSION a. Expression de PP
Page 169 and 170:
différence significative d'express
Page 171 and 172:
témoin PPARy cytochrome c Figure 4
Page 173 and 174:
98/3413 98/3957 99/4514 MT (pb) il/
Page 175 and 176:
dans du TBE (figure 48). Le produit
Page 177 and 178:
DISCUSSION GENERALE 102
Page 179 and 180:
l'expression de PPAR~ précède cel
Page 181 and 182:
Il est possible d'envisager un rôl
Page 183 and 184:
par conséquent difficile de relier
Page 185 and 186:
même coupe. Les résultats obtenus
Page 187 and 188:
1. Adams, M., M. Reginato, D. Shao,
Page 189 and 190:
46. Chevalier, S., and R. A Roberts
Page 191 and 192:
88. Fenoglio, C., R. Richard, and G
Page 193 and 194:
132. Hirase, N., T. Kanase, Y. Mu,
Page 195 and 196:
activated receptors by coactivator-
Page 197 and 198:
218. McLellan, E., R Owen, J. Stepi
Page 199 and 200:
262. Puigserver, P., G. Adelmant, Z
Page 201 and 202:
306. Silberg, D., E. Furth, J. Tayl
Page 203 and 204:
eceptor-y agonists through inductio
Page 205 and 206:
~. ' , \ .•1 . ·r·'··.· .~ ,
Page 207 and 208:
Volume 48(5): 603-611, 2000 The Jou
Page 209 and 210:
PPARs and Human Fetal Digestive Tra
Page 211 and 212:
Page 213 and 214:
Page 215 and 216:
Page 217 and 218:
148 neoplasia. STRUCTURAL ORGANIZAT
Page 219 and 220:
150 Hervé Schohn et al. Table 1 :
Page 221 and 222:
152 hydrolyses triglycerides presen
Page 223 and 224:
154 production and in inducible cyc
Page 225 and 226:
• 'i. 156 APC gene [154]. The APC
Page 227 and 228:
-.;",, 158 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13.
Page 229 and 230:
.: . ~ 160 Hervé Schohn et al. 61.
Page 231 and 232:
162 113. Marx, N., Shuhova, G., Mur
Page 233 and 234:
164 170. Sarraf, P., Mueller, E., S
Page 235 and 236:
~LSEVIER Biology of the Cell 94 (20
Page 237 and 238:
C. Huill et al. / Biology of the Ce
Page 239 and 240:
C. Huin et al. 1 Biology of the CeU
Page 241 and 242:
C. Huin et al. / Biology of the Cel
Page 243 and 244:
C. Hlli" el al./ Bialag)' of/Ile Ce
Page 245 and 246:
C. Huin et al. 1 Biology ofthe Cell
Page 247 and 248:
C. Huill et al. 1 Biology of the Ce
Page 249 and 250:
FACULTE DES SCIENCES & TECHNIQUES S
Page 251 and 252:
Peroxisome proliferator-activated r
show all

Ce document numérisé est le fruit d'un long travail approuvé par le ...

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?