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ARNm des PPARcx par Northern blotting (figure 35). Les sondes ADNc utilisées dans cette
technique sont issues des séquences décrites dans la littérature [303]. Trois transcrits de
1,8, 5,8 et 10 kb ont été mis en évidence pour PPARcx, en accord avec les résultats déjà
publiés [99,317].
L'analyse par densitométrie du signal à 1,8 kb révèle une élévation de 1,5 fois du taux
des ARNm de PPARcx après 10 jours de culture comparativement à la valeur témoin obtenue
à 5 jours de culture. Une légère diminution du taux des ARNm est observée après 15 jours
de culture lorsque la quantification est appréciée à partir des ARN polyadénylés. Par
protection à la nucléase 81, la séquence ADNc sélectionnée pour produire la sonde PPARcx
protège un seul transcrit de 255 paires de bases (pb) (figures 36A et 37). La quantification
d'ARNm réalisée par cette technique confirme les résultats obtenus par Northern blotting : le
taux des ARNm de PPARcx reste globalement constant.
Par RT-PCR compétitive, le taux des ARNm correspondant à PPARcx augmente
progressivement au cours de la culture (figure 38B et tableau 9). Entre 5 et 15 jours de
culture, le signal obtenu augmente de 2,3 fois par rapport à la valeur témoin obtenue à 5
jours de culture. Par RT-PCR semi-quantitative, les résultats obtenus sont différents de ceux
observés par les techniques précédentes (tableau 9). Le taux des ARNm de PPARcx décroît
faiblement entre 5 et 10 jours de culture puis est constant entre 10 et 15 jours de culture.
Mesure du taux des ARNm de PPARf3 dans les cellules Caco-2
L'expression transcriptionnelle de PPAR~ a été étudiée par RT-PCR compétitive et
semi-quantitative à partir des ARN totaux extraits des cellules Caco-2 à 5, 10 et 15 jours de
culture. Les résultats obtenus sont contradictoires (tableau 9).
Par RT-PCR compétitive, le taux des ARNm de PPAR~ augmente de 4 fois jusqu'à 6
fois entre 5 et 10 jours de culture. Par RT-PCR semi-quantitative, le taux des ARNm de
PPAR~ présente un pic d'expression à 10 jours puis devient faible lorsque les cellules sont
différenciées (tableau 9).
Mesure du taux des ARNm de PPARydans les cellules Caco-2
• PPARy
Par Northern blotting les ARN totaux et les ARN polyadénylés issus des cellules
Caco-2 à 5, 10 et 15 jours de culture ont permis d'étudier le taux des ARNm codant PPARy.
La sonde ADNc utilisée dans cette technique est issue des séquences de Fajas et al. [83] et
de Elbrecht et al. [80]. Cette sonde ADNc est sélectionnée dans la partie AlB du récepteur
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