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Variations du taux transcriptionnel des PPARy
Durant la différenciation des cellules Caco-2 et selon les techniques utilisées (RT­
PCR compétitve, RT-PCR semi-quantitative et Northern blotting) aucun changement
signifiquatif est n'observé concernant le taux transcriptionnel de PPARy. Les variations du
taux transcriptionnel de PPARy s'observent lorsque les isoformes sont étudiées séparément.
Par protection à la nucléase 81, et grâce à une sonde spécifique de chaque isoforme
de PPARy, nous avons détecté uniquement la présence de PPARy2 et de PPAR13 dans les
cellules Caco-2. Ces résultats sont également confirmés par RT-PCR semi-nichée où seuls
les ARNm PPARy2 et 13 sont détectés dans les cellules Caco-2. Dans ces cellules,
l'expression de l'ARNm PPARy1 est absente. L'expression de PPARy étudiée dans les
cellules HT29 entre 5 et 15 jours de culture donne des résultats identiques par rapport aux
cellules Caco-2. La présence d'ARNm de PPARy1 n'est pas détécté, seuls les ARNm de
PPARy2 et de PPAR13 sont détectables entre 5 et 15 jours de culture (tableau 10). Ce
résultat concernant PPARy1 est en désaccord avec les travaux antérieurs de Fajas et al.
[84]. Cette différence peut-être due à la nature et à la spécificité de la sonde utilisée.
Nous avons montré d'autre part que les cellules Caco-2 exprimaient les ARNm
PPARy2 et 13 et que seull'ARNm PPARy3 présentait un accroissement de son taux au cours
de la culture des cellules Caco-2. Des résultats similaires concernant l'ARNm PPAR13
avaient été obtenus par d'autres équipes [84, 187]. Au contraire, l'expression globale de
PPARy diminue faiblement dans les cellules HT29 (tableau 10). Cette diminution est
également observée pour les ARNm PPARy2 et PPAR13 étudiés par RT-PCR semi-nichée
(tableau 10). Cependant, cette diminution ne semble pas significative.
Variations du taux des protéines de PPARy
Pendant la différenciation des cellules Caco-2, aucune modification significative
s'observe dans le taux d'ARNm PPARy2. Par contre, les tests réalisés en immunocytochimie
et en immunoréplique montrent que le taux de la protéine augmente significativement au
cours de la différenciation lorsque l'anticorps polyclonal dirigé spécifiquement contre la
protéine humaine de PPARy2 est utilisé. D'autre part, une augmentation significative du taux
des ARNm PPAR13 a été observée entre 5 et 15 jours de culture des cellules Caco-2. Or, il a
été démontré que la protéine PPARy1 est traduite par les ARNm de PPARy1 et PPAR13 [83,
84]. En utilisant un anticorps polyclonal reconnaissant aussi bien les protéines PPARy1 et
PPARy2, nos résultats en immunohistochimie et en immunoréplique ont révélé une
augmentation progressive de PPARy durant la différenciation des cellules Caco-2.
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