Ce document numérisé est le fruit d'un long travail approuvé par le ...

l'activité enzymatique de AOX et celle de la catalase sont présentes dès 5 jours de culture
même si les structures DAB-positives ne sont pas détectables à ce stade de culture. Ces
résultats sont en accord avec les travaux précédents montrant que les peroxysomes sont
absents dans les cellules issues de carcinomes coliques en dépit de la présence de AOX et
de la catalase [32, 180]. La différenciation des cellules Caco-2 est accompagnée par une
augmentation du nombre des peroxysomes et de l'activité de leurs enzymes. Ces
modifications métaboliques ressemblent aux changements observés le long de l'axe cryptovillositaire
de l'intestin grêle [32]. De plus, la différenciation des peroxysomes dans les
cellules Caco-2 est similaire à celle rencontrée dans les entérocytes humains entre 16
semaines de gestation [61] et l'âge adulte [278].
b. L'expression de PPARa augmente au cours de la différenciation des cellules
Caco-2
Dans cette étude, le taux des ARNm de PPARa est étudié par Northern blotting, par
protection à la nucléase S1 et par RT-PCR compétitive. Nous avons utilisé plusieurs
techniques de quantification des ARNm dans le but de confirmer les résultats obtenus par
une seule des techniques citées précédemment. Les études par Northern blotting et par
protection à la nucléase S1 sont des techniques dites directes. Les sondes radioactives
piègent les ARNm à étudier. Seulement, ces deux techniques nécessitent l'utilisation de
radioéléments avec les risques que cela représente pour le manipulateur. Les techniques de
RT-PCR sont des techniques de quantification non directes. Cependant, la RT-PCR de type
compétitive permet de quantifier le taux des ARNm par rapport à deux témoins internes: le
compétiteur et la G3PDH (enzyme étant exprimée d'une façon constitutive).
Le taux des ARNm de PPARa et celui de la protéine correspondante augmentent
entre 5 et 10 jours de culture, stade précoce de la différenciation cellulaire. La quantité de la
protéine PPARa augmente régulièrement bien que le taux des ARNm codant cet isotype
reste constant à 15 jours de culture. Les résultats obtenus par immunocytochimie indiquent
au début de la culture la présence de PPARa au niveau nucléaire mais également
cytoplasmique, de type granulaire et en très faible quantité. L'intensité des signaux
augmente avec le processus de différenciation de ces cellules et devient majoritairement
cytoplasmique.
Parallèlement, nous avons étudié le taux des ARNm et celui de la protéine de PPARa
dans les cellules HT29 entre 5 et 15 jours de culture. Ces cellules restent indifférenciées.
Les résultats obtenus au niveau des cellules HT29 sont similaires à ceux obtenus pour les
cellules Caco-2. Au cours de la culture, le taux des ARMm codant PPARa et celui de la
87