Cuvânt Înainte Imunologia este unul dintre ... - Cursuri Medicina

Metodele de clivare şi de denaturare chimicã a moleculei de imunoglobulinã au contribuit laînţelegerea structurii şi funcţiei sale. Clivarea s-a realizat cu enzime proteolitice (papainã,pepsinã, tripsinã) sau prin cianolizã cu BrCN.Fig. 13. Clivajul enzimatic al moleculei de IgG1 umane. Pepsina cliveazã catena H şi elibereazãfragmentele F(ab)2 şi regiunea Fc (segmentul cristalizabil). Hidroliza prelungitã taie fragmentulFc în peptide scurte. Papaina cliveazã molecula în regiunea balama (la restul 224) şi elibereazãdouã fragmente Fab şi un fragment Fc (dupã Roitt, 1984).Papaina scindeazã mo-lecula de imunoglobulinã la nivelul regiunii balama (aminoacidul 224) şielibe-reazã douã fragmente Fab (Fragment antigen binding) şi fragmentul Fc (cristalizabil).Fiecare fragment Fab (50 kD) conţine un lanţ L întreg şi jumãtatea N-terminalã a lanţului H,notatã cu Fd (difficult), care cuprinde domeniile VH şi CH1. Frag-mentul Fab poate fi scindattransversal şi rezultã frag-mentul Fv (variabil) format din domeniile VL şi VH, se-parat dedomeniile CL şi CH1.Fragmentul Fc (50 kD) este format din jumãtãţile C-terminale ale celor douã catene H, uniteprintr-o legãturã S-S şi prin legãturi necovalente.Pepsina cliveazã lan-ţurile H sub regiunea balama şi elibereazã fragmentul Fc, mai mic decâtfragmentul Fc papainic şi douã fragmente Fab legate între ele (Fab)2, prin punţi S-Sintercatenare.BrCN scindeazã lanţurile polipeptidice la nivelul secvenţelor cu Met, pe care o transformã înhomoserinã. Fragmentele rezultate sunt heterogene ca mãrime, în funcţie de frecvenţametioninei. Polipeptidele rezultate prin clivare enzimaticã, cât şi prin cianolizã, se separã printehnici cromatografice.Denaturarea moleculei de imunoglobulinã prin reducerea legãturilor S-S. Agenţii reducãtori(mercaptoetanolul, mercaptoetanolamina, ditiotreitolul) au o grupare SH liberã şi reduc legãturileS-S intercatenare şi intracatenare.HO CH2 CH2 SH (Mercaptoetanolul)