Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

CHAPITRE IV : Essais de propagation du virus in vitro.
Publication 7: Primary cuIture of Pacifie oyster, Crassostrea gigas, heart cells.
Journal of Tissue Culture Methods
Publication 8: Isolation and culture of heart cells from the European flat oyster, Ostrea
edulis.
Methods in Cell Science
L'étude des virus est en grande partie liée à la possibilité de les propager in vitro sur
des cellules en culture, lignées cellulaires établies ou primocultures (Girard et Hirth, 1989a).
De plus, l'infection de monocouches de cellules en culture peut permettre d'observer
un effet cytopathogène caractéristique du virus inoculé. Dans ce cas, elle peut constituer une
méthode de diagnostic et de quantification relativement simple à mettre en oeuvre (Enders et
al. , 1949 ; Lê Quan-Sang et Maurin, 1985 ; de Kinkelin et al., 1985).
1 • Essais de propagation du virus de type herpès sur lignées cellulaires
hétérologues.
L'absence de lignées cellulaires de mollusques marins a conduit à réaliser des essais
d'infection de lignées cellulaires hétérologues, par le virus de type herpès observé chez
l'huître creuse, Crassostrea gigas. Différentes lignées originaires de poissons ont été utilisées
en supposant un tropisme éventuel de ce virus pour les animaux aquatiques. Une lignée
originaire d'insecte a également été testée. Dans ce dernier cas, c'est le tropisme pour des
cellules d'invertébrés qui a été exploré.
1.1 - Essais préliminaires sur lignées cellulaires de poisson et d'insecte
Ces essais ont été réalisés à partir de différentes lignées cellulaires de poisson: BF2
(Bluegill Fry), SBL (Sea Bass Larvae), BB (Brown Bull Head), RTG2 (Rainbow Trout
Gonad), CHSE (Chinook Salmon Embryo) et EPC (Epithelioma Papulosum cyprini), ainsi
qu'une lignée cellulaire d'insecte: SF9 (Spodopterafrugiperda).
Le choix des lignées cellulaires testées (Figure 1) a été déterminés selon différents
critères. En premier lieu, les lignées choisies sont soit de type fibroblastique (SBL, BF2,
RTG2 et SF9), soit de type épithélioïde (CHSE, BB, EPC). En effet, le virus apparenté aux
herpès de C. gigas présente in vivo un tropisme marquée pour les fibroblastes, mais est
également parfois observé dans les cellules épithéliales. De plus, les lignées cellulaires de
poissons sont sensibles à plusieurs virus, et en particulier des virus de poissons apparentés aux
herpès (de Kinkelin et al., 1985). Il faut noter d'autre part que certaines de ces lignées (RTG2,
SBL et CHSE) sont originaires de tissus embryonnaires et sont de ce fait relativement peu
différenciées.
Ces différentes lignées ont été cultivées selon des méthodes classiques, décrites en
annexe. Le milieu de culture utilisé pour la culture des cellules de poisson était en milieu
essentiel minimum de Eagle (EMEM, modification de Glasgow) additionné de 10% de sérum
de veau foetal (SVF). La culture des cellules d'insecte a été réalisée en milieu de Grace
supplémenté par 10% de SVF.
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