Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

ésine Epon. Des coupes semi-fines (1 Ilm), colorées au bleu de toluidine ont été observées au
microscope photonique. Des coupes ultrafines (80 à 100 nm) ont également été réalisées,
contrastées à l'acétate d'uranyle et au citrate de plomb, puis observées à l'aide d'un
microscope électronique à transmission JEOL, JEM 1200 EX à 60 kVolts.
L'ensemble de ces protocoles est détaillé en annexe 2.
D'importantes lésions sont observées sur coupes histologiques et coupes semi-fines
chez les larves malades. Ces lésions sont principalement localisées au niveau du tissu
conjonctif (cellules de type fibroblastique) et, plus rarement, à l'épithélium du vélum et du
manteau. Elles correspondent à la présence de cellules possédant une basophilie marquée, et
sont associées à des images de nécrose dans le cas d'infections importantes (Figure 1).
Ce tropisme apparent du virus pour les cellules de type fibroblastique est un des
aspects biologiques caractéristiques de la sous famille des Betaherpesvirinae (Matthews,
1982). Cette particularité a également été décrite par Hine et al. (1992) lors de mortalités
larvaires de C. gigas en Nouvelle-Zélande, associées à la présence d'un virus de type herpès.
En microscopie électronique, les cellules hyperbasophiles du tissu conjonctif et du
vélum présentent un noyau hypertrophié à nucléoplasme dense aux électrons et possèdent une
chromatine rejetée en périphérie, contre la membrane nucléaire. Par ailleurs, leur cytoplasme
est souvent réduit à une simple frange péri nucléaire. Ces cellules contiennent des particules
virales en position intranucléaire et intracytoplasmique. Des virions sont également observés
en position extracellulaire (Figures 2 et 3).
Les particules virales intranucléaires sont circulaires, ovoïdes ou polygonales, de 72 à
75 nm de diamètre. Certaines de ces particules apparaissent vides et sont interprétées comme
des capsides. D'autres contiennent un nucléoïde dense aux électrons de forme variable
(toroïdale à parallélépipédique), de 45 à 50 nm en taille et correspondent à des nucléocapsides
(Figure 4). Les capsides, qu'elles soient vides ou pleines, sont le plus souvent disséminées de
façon irrégulière dans le nucléoplasme, mais elles peuvent aussi être observées en plage
(Figure 5). Des virions enveloppés sont également parfois visibles en position intranucléaire, à
l'intérieur d'inclusions limitées par une membrane (Figure 5). Ces images peuvent être
interprétées comme des virions inclus dans des invaginations de la membrane interne du
noyau.
Les particules intracytoplasmiques, de forme arrondie, mesurent en moyenne 105 nm
et possèdent une enveloppe constituée d'une membrane unitaire trilamellaire. Elles
contiennent des structures identiques en forme et en taille aux capsides observées dans les
noyaux des cellules infectées.
Des virions non enveloppés peuvent également être visibles dans le cytoplasme. Il
semble toutefois que dans ce cas, les particules virales aient été libérées dans le cytoplasme
par rupture de la membrane nucléaire (Figure 6).
Les virions en position extracellulaire sont enveloppés (Figure 7). Ils peuvent présenter
des projections à la surface de l'enveloppe (Figure 8). De fins fibrilles sont également visibles
dans l'espace clair, entre le nucléoïde et la face interne de la capside (Figure 8). Parfois, ces
particules possèdent une queue (Figure 9).
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