Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

l'ultrastructure et est principalement utilisé pour conserver les échantillons susceptibles d'être
analysés ultérieurement en microscopie électronique.
Composition du liquide de Bouin:
Acide picrique
Eau distillée
Formaldéhyde à 38%
Acide acétique cristallisable
20 g
750 ml
250 ml
5% (ajouter extemporanément)
Le liquide de Bouin permet généralement de bien conserver les structures
antigéniques. Contenant de l'acide picrique, ce fixateur a de plus des propriété décalcifiantes
et est donc utilisé pour la fixation des jeunes naissains ou des larves d'huître. Ces animaux,
trop petits pour être disséqués doivent en effet être fixés avec leur coquille. Après quelques
jours de fixation dans le liquide de Bouin, la décalcification permet alors de ramollir
suffisamment les coquilles pour réaliser des coupes.
1.2 - Déshydratation, imprégnation et inclusion des échantillons
L'inclusion des pièces en paraffine nécessite différentes étapes qui vont permettre
d'éliminer progressivement l'eau contenue dans les tissus et de la remplacer dans un premier
temps par de l'alcool, puis du xylène et enfin par de la paraffine.
Après fixation au Carson ou au Davidson, les tissus sont déshydratés par des bains
successifs d'éthanol à 95°, puis d'éthanol absolu, afin d'éliminer l'eau des tissus.
L' imprégnation des pièces par un solvant de la paraffine, le xylène, permet d'éliminer l'alcool
contenu dans les tissus et facilite l'imprégnation ultérieure par la paraffine liquide à 60°C. Ces
opérations sont réalisées à l'aide d'un automate LKB .
Après fixation au Bouin, la déshydratation est réalisée par des bains successifs de
butanol. Cet alcool étant un solvant de la paraffine, l'imprégnation par des bains de paraffine
liquide (à 60°C) est réalisée directement après la déshydratation.
Des blocs sont réalisés en refroidissant les tissus dans des de moules métalliques
remplis de paraffine, sur une table réfrigérante (LKB).
1.3 - Confection des coupes
Après refroidissement des blocs sur une plaque réfrigérée qui permet de durcir la
paraffine, des coupes histologiques de 2 à 3 !lm d'épaisseur sont réalisées à l'aide d'un
microtome LKB. Les rubans ainsi obtenus sont déposés à la surface d'un bain-marie à 37°C.
Après étalement des coupes, celles ci sont récupérées sur des lames histologiques, égouttées et
séchées une nuit à 60°C. Ce séchage à chaud permet d'éliminer l'excès de paraffine et ainsi de
coller les coupes sur les lames histologiques.
lA - Coloration et montage des lames
Avant coloration, les coupes sont déparaffinées par deux bains successifs de xylène de
dix à vingt minutes. Ce solvant est ensuite éliminé par deux bains d'éthanol absolu de dix
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