Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

3 - Essais d'infection expérimentale de larves, naissains et adultes de Crassostrea gigas en conditions
non axéniques 92
l.I-LaNes 92
l.2 - Naissains et adultes 94
CHAPITRE III : EFFET DE LA TEMPERATURE SUR LE DEVELOPPEMENT DU
VIRUS APPARENTE AUX HERPES CHEZ LES LARVES DE CRASSOSTREA
GIGAS 95
CHAPITRE IV: ESSAIS DE PROPAGATION DU VIRUS IN VITRO. 115
1 - Essais de propagation du virus de type herpès sur lignées cellulaires hétérologues. 115
1.1 - Essais préliminaires sur lignées cellulaires de poisson et d'insecte 115
1.2- Optimisation des conditions de culture et d'infection des cellules BF2. 116
2 - Essais d'infection de primocultures de cellules d'huître creuse, Crassostrca gigas 121
2.1 - Mise au point d'un protocole de primoculture de cellules cardiaques d'huître creuse, Crassas/rea
gigas 12 1
2.2. Essais d'infection de primocultures de cellules cardiaques de Crassas/rea gigas Il7
CHAPITRE V : MISE AU POINT D'UN PROTOCOLE DE PURIFICATION DES
PARTICULES VIRALES 138
1 - Choix et conservation du matériel virosé 138
2 - C hoix du tampon de purification. 139
3 - Mise au point d'une méthode de broyage des tissus vi rosés. 139
4 - Filtration et clarification des broyats 140
5 - Fractionnement des broyats 140
CHAPITRE VI: MISE AU POINT DE METHODES DE DIAGNOSTIC DU VIRUS 144
1 - Mise au point de méthodes de diagnostic à l'aide de réactifs hétérologues 145
1.1 - Recherche d'épitopes conseNés chez le virus de type herpès de Crassas/rea gigas et d'autres virus
apparentés à la famille des Herpesviridae 145
1.2 - Recherche de séquences conservées chez les virus apparentés aux herpès. 151
1.2. 1 - Alignement des séquences DNA polymerase (pol) virales 15 1
1.2.2 - Alignement des séquences DNA binding protein (dbp) virales. 155
2 - Préparation de réactifs spécifiques du virus 155
2. 1 - Essais de clonage de fragments du génome viral 155
2. 1.1- Clonage de l'ADN total extrait d'animaux virosés. 155
2.1 .2 - Extraction, caractérisation et clonage du génome viral à partir de particules virales purifiées 158
2.2 - Préparation de réactifs immunologiques spécifiques 162
2.2. 1 - Essais d'immunisation de souris à partir de broyats de laNes de Crassas/rea gigas virosées 162
2.2. 1 - Immunisation de souris contre des échantillons de virus purifié à partir de laNes de Crassas/rea
gigas 162
CONCLUSION 165
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