Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

2 - Prélever 1 ml de tampon d'hybridation pour y diluer la sonde marquée (10 ng/ml en
concentration finale), l' additionner à nouveau dans le sac ou le tube d'hybridation.
Placer à 42°C sous agitation douce, pendant 15 à 20h.
3 - Laver la membrane en tampon de lavage 1 (minimum 2 mllcm 2 , 42°C, deux fois 20
min).
4 - Laver la membrane en tampon de lavage II (minimum 2 mllcm 2 , température
ambiante, deux fois 5 min).
5 - Préparer le substrat luminescent (luminol) comme indiqué par le fournisseur, en
mélangeant volume à volume les deux solutions de révélation fournies. Egoutter la
membrane, la placer dans une boîte propre et la recouvrir de solution de révélation
(0,25 ml/cm 2 ) pendant 1 min.
6 - Egoutter la membrane, l'envelopper dans un film Saran Vrap, sans faire de bulles
du côté des spots d'ADN.
7 - Exposer un film (Hyperfilm ECL) à l'aide d'une cassette à autoradiographie.
Généralement un premier film est exposé 1 min. puis un second, selon les résultats, 15
min à 2h. Au delà de 2h, l'émission est négligeable, le film peut y être exposé pendant
plusieurs jours sans modification notable du résultat.
8 - Révéler le film 5 min, fixer 10 min, rincer à l'eau courante 10 min, puis à l'eau
distillée et sécher.
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