Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

1 • Mise au point de méthodes de diagnostic à l'aide de réactifs hétérologues
1.1 - Recherche d'épitopes conservés chez le virus de type herpès de Crassos/rea gigas ct
d'autres virus apparentés à la famille des Herpesviridae
U ne comparaison antigénique entre le virus apparenté aux herpès de C. gigas et
d'autres Herpesviridae de poisson ou humains a été réalisée en immunohistochimie et, pour
certains réactifs, en immunogold (Annexe 2). Ces essais ont été réalisés en utilisant des
réactifs disponibles. Des anticorps spécifiques du Channel Catfish Virus (CCV) ont été
fournis par le Professeur R.P. Hedrick (Université de Californie, Davis, U.S.A.): un anticorps
monoclonal spécifique de glycoprotéines d'enveloppe et un sérum polyclonal. Un sérum
polyclonal spécifique d'un autre herpèsvirus de poisson, l'Oncorhynchus masou Virus (OMV),
a été fourni par le Docteur M. Yoshimizu (Université d'Okkaido, Japon). Des réactifs
commerciaux, spécifiques de virus humains ont également été testés. Il s'agit d'un anticorps
polyclonal mixte, spécifique des ICPs et des antigènes de structure tardifs des virus Herpès
Simplex de type 1 et 2 (HSVI et HSV2) (Virostat, Interchim) et deux anticorps monoclonaux
spécifiques, respectivement, d'un antigène nucléaire précoce et d'un antigène cytoplasmique
tardif du Cytomégalovirus Humain (HCMV) (Novocastra, Tebu).
Ces essais ont été réalisés dans l'hypothèse de l'existence d'épi topes conservés,
communs au virus observé chez l'huître creuse, C. gigas. et d'autres virus apparentés à la
famille des Herpesviridae. Les réactifs spécifiques de ce type de structure, pourraient alors
être utilisés à des fins diagnostiques sur des échantillons suspects de larves et de naissains.
Parmi les réactifs testés en immunohistochimie, seul le sérum polyclonal, spécifique
du CCV, a permis de visualiser une réaction croisée sur des coupes de larves et de naissains
de C. gigas infectés (Publication 9 : Figure 2) .
Chez le naissain, le marquage spécifique de certaines cellules peut être observé dans le
tissu conjonctif du manteau, de la glande digestive et des branchies. Selon les cellules, ce
marquage est localisé au niveau du noyau et/ou du cytoplasme (Publication 9 : Figures 2a et
2b). Cependant, le marquage est limité à petit nombre de cellules et l'intensité de la réaction
est relativement faible. De ce fait, le sérum polyclonal spécifique du CCV ne peut être retenu
pour une application ultérieure au diagnostic du virus d'huître.
Chez les larves de C. gigas, un marquage similaire a été observé au niveau des noyaux
et/ou du cytoplasme des cellules virosées (Publication 9 : Figure 2c). Toutefois, un bruit de
fond important sur la glande digestive des larves saines (Publication 9 : Figure 2d) rend
l'interprétation des résultats difficile dans un cadre diagnostique.
Le marquage par l'anticorps polyclonal spécifique du CCV est visualisé au niveau de
cellules qui présentent un noyau hypertrophié et dont la chromatine est rejetée en périphérie
(Renault et al., 1 994a). Les cellules dont le noyau est fortement condensé, fréquemment
observés en histologie en association à une infection par le virus de type herpès (Renault et
al., 1994a), ne sont quant à elles que rarement marquées par ce sérum.
Ces résultats peuvent être corrélés aux observation réalisées en microscopie
électronique à transmission. En effet, les particules virales peuvent être observées dans le
noyau et/ou dans le cytoplasme des cellules, selon le stade du cycle de multiplication. Et, dans
les phases les plus avancés de l'infection, la majorité des virions est localisée en position
extracellulaire. Les cellules infectées présentent généralement un noyau hypertrophié, dont la
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