Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

Annexe 2 : Méthodes et techniques
Certaines méthodes, notamment l'infection expérimentale de larves axéniques par le
virus de type herpès, la technique de primoculture de cellules cardiaques d'huître creuse et
plate et la purification du virus de type herpès figurent dans ce mémoire sous forme de
publications ou de résultats dans les chapitres correspondants.
1 - Méthodes histologiques
L'histologie est une technique visant à l'observation des structures cellulaires et
tissulaires en microscopie photonique. La préparation des tissus comporte différentes étapes:
1.1 - Fixation des tissus
- Fixation des tissus
- Déshydratation, imprégnation et inclusion des échantillons
- Confection des coupes
- Coloration et montage des lames
Le fixateur a pour rôle de maintenir les tissus dans un état aussi proche que possible de
leur morphologie in vivo et de conserver les tissus pour qu'il ne se dégradent pas avec le
temps. Les principaux fixateurs utilisés pour l'étude des mollusques marins sont le Davidson
et le Carson, ils sont respectivement des solutions de formol salée et tamponnée. Le liquide de
Bouin peut également être utilisé pour des applications particulières.
Composition du liquide de Davidson:
Eau de mer
Alcool à 95°
Formaldéhyde à 38%
Glycérol
Acide acétique cristallisable
1200 ml
1200 ml
300 ml
400 ml
10% (ajouter extemporanément)
Le liquide de Davidson, du fait de sa composition à base d'eau de mer, permet de bien
préserver la structure des tissus. De plus, les coupes de tissus fixés au Davidson peuvent être
colorées ultérieurement par des méthodes histochimiques telles que la méthode de Feulgen et
Rossenbeck ou la coloration à l'acridine orange.
Composition du liquide de Carson:
NaHl04,2HP
NaOH
Eau distillée
Formaldéhyde à 40%
Ajuster le pH à 7,2 - 7,4
Le liquide de Carson est moins approprié
d' échantillons en histologie. Toutefois, il permet
205
23,8 g
5,2 g
900 ml
100 ml
que le Davidson pour l' analyse
une très bonne conservation de