Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

Coloration des coupes réhydratées;
Hydrolyse acide par l'HCl 1 N à 60°C
Rincer à l'eau courante
Rincer à l'eau distillée
Réactif de Schiff (Merck)
Rincer à l'eau courante
Ethanol absolu
6 min
S min
1 min
60 min
10 min
3 bains de 2 min
Xylène 2 bains de 10 min
Monter les lames sous lamelle avec une goutte de résine Eukitt
Coloration à l'acridine orange
L'acridine orange se fixe sur les molécules et structures basophiles, elle pennet en
particulier de visualiser la présence d'ARN et d'ADN. Au microscope à épifluorescence, ce
colorant métachromatique peut donner lieu à une fluorescence verte ou rouge, qui reflète
différents états de l'acridine orange. Ainsi, lorsque celle ci est fixée sur un acide nucléique
(ADN ou ARN) double brin, la fluorescence observée est verte. Lorsque l'acridine orange est
fixée sur un acide nucléique simple brin, elle fluoresce en rouge.
Préparation des réacti fs ;
Solution d'acide citrique MIlO
Solution de phosphate disodique MIS
21,01 g/l
28,39 g/l
Tampon de Mac Ilvaine, pH 4 ;
Acide citrique MIlO 122,9 ml
Phosphate di sodique MIS 77,1 ml
Préparer extemporanément à partir des solutions stocks.
Solution stock d'acridine orange 0,1 %
Préparer en tampon de Mac Ilvaine pH4.
Conserver à l'abri de la lumière, à 4°C.
Coloration des coypes réhydratées;
Colorer avec la solution stock d'acridine orange
diluée au 1/10 en tampon de Mac Ilvaine pH4 10 min
Rincer en tampon de Mac Ilvaine pH4 2 fois 10 min
Monter sous lamelle, avec une goutte de tampon glycériné et lutter au vernis à
ongles. L'observation des coupes est réalisée sous un microscope à
épi fluorescence.
2 - Méthodes de microscopie électronique
La préparation des échantillons pour la microscopie électronique comporte plusieurs
étapes;
- Fixation des tissus
- Décalcification éventuelle des échantillons
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