Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

Deuxième partie: Etude de virus apparentés aux Herpesviridae
La deuxième partie de ce travail de thèse est consacrée à l'étude d'un virus apparenté
aux Herpesviridae et associé à des mortalités chez l'huître japonaise, Crassostrea gigas.
Après un premier volet, consacré à la description anatomopathologique de l'infection
et à l'identification morphologique du virus chez les larves et le naissain de C. gigas, les
différentes étapes de ce travail correspondent à une approche de pathologie générale classique.
Les principaux résultats sont rappelés ci-dessous.
Dans l'objectif de déterminer le pouvoir pathogène effectif de ce virus, des essais de
reproduction expérimentale de la maladie ont été réalisés sur différents stades de
développement. Ainsi, il a été possible de reproduire l'infection virale chez les larves de C.
gigas, à partir de broyats ultrafiltrés de larves d'huître creuse et d'huître plate, Ostrea edulis,
vi rosées. La reproduction des mortalités chez les larves démontre le pouvoir pathogène du
virus pour ces animaux. Par ailleurs, les essais d'infection croisée entre C. gigas et 0. edulis
semblent montrer le caractère ubiquitaire des virus de type herpès, associés aux larves
d'huître.
L'intervention de différents facteurs, en particulier la température, sur l'expression de
la maladie a été expérimentée chez les larves de C. gigas. Les résultats obtenus montrent que
le virus se développe chez les larves à 25-26°C. L'infection virale aboutit à cette température
à un cycle viral productif, associé à des mortalités importantes. A plus basse température (22-
2)0C), la propagation du virus semble être réduite car aucune particule virale n'a pu être
détectée chez ces larves. La présence de lésions nucléaires chez certains individus élevés à 22-
23 oC peut être interprétée comme un cycle viral peu productif ou comme un cycle viral
abortif. Dans le même temps, l'influence de l'origine des géniteurs a été démontrée et permet
de suspecter une transmission verticale du virus.
D'autres travaux, ayant pour objectif commun la mise au point d'un système de
propagation du virus in vitro ont été réalisés. En l'absence de lignées cellulaires de bivalves,
différentes lignées "hétérologues" (cellules de poissons et d'insectes) ont été utilisées dans un
premier temps. Puis, des essais d'infection de primocultures de cellules "homologues" ont
nécessité l'établissement préalable d'un protocole reproductible à partir de tissus cardiaques
d'huître. Ces essais n'ont pas permis de réaliser l'infection de cellules in vitro. Ces travaux ont
permis de visualiser un effet cytopathogène associé à l'inoculation de broyats ultrafiltrés de
tissus virosés, sur des monocouches de cellules de poisson BF2 et, de façon plus discrète, sur
des primocultures de tissus cardiaques d'huître creuse. Ces résultats sont prometteurs. Ils
peuvent permettre d'envisager d'obtenir un cycle viral productif sur ces cellules, notamment
en améliorant les techniques de culture et les modalités de l'infection.
Enfin, les derniers axes de ce travail ont eu pour objectif commun l'obtention de
réactifs spécifiques pouvant être utilisés à des fins diagnostiques:
En l'absence de virus purifié, des travaux ont été réalisés à partir de réactifs
hétérologues et homologues. Ainsi, la recherche d'antigènes éventuellement conservés chez le
virus de C. gigas et d'autres Herpesviridae, a été réalisée à l'aide d'anticorps spécifiques de
différents virus humains et de poissons. De plus, la recherche d'éventuelles séquences
conservées parmi les virus apparentés à cette famille a été réalisée par alignement de
167