Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

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Un premier chapitre est consacré à la description anatomopathologique de l'infection et
à l'identification morphologique du virus chez les larves et le naissains de C. gigas. Puis, dans
l'objectif de déterminer le pouvoir pathogène effectif de ce virus, des essais de reproduction
expérimentale de la maladie ont été réalisés sur différents stades de développement (deuxième
chapitre). L'intervention de différents facteurs, en particulier la température, sur l'expression
de la maladie a été expérimentée chez les larves de C. gigas. Dans le même temps, l'influence
de l'origine des géniteurs a été testée (troisième chapitre).
Différents travaux, ayant pour objectif commun la mise au point d'un système de
propagation du virus in vitro ont été réalisés. En l'absence de lignées cellulaires de bivalves,
différentes lignées "hétérologues" (cellules de poissons et d'insectes) ont été utilisées dans un
premier temps. Puis, des essais d'infection de primocultures de cellules "homologues" ont
nécessité l'établissement préalable d'un protocole reproductible à partir de tissus cardiaque
d'huître (quatrième chapitre).
Enfin, les derniers axes de ce travail ont eu pour objectif commun l'obtention de
réactifs spécifiques pouvant être utilisés à des fins diagnostiques (cinquième et sixième
chapitres) :
En l'absence de virus purifié, des travaux ont été réalisés à partir de réactifs
hétérologues et homologues. Ainsi, la recherche d'antigènes éventuellement conservés chez le
virus de C. gigas et d'autres Herpesviridae, a été réalisée à l'aide d'anticorps spécifiques de
différents virus humains et de poissons. De plus, la recherche d'éventuelles séquences
conservées parmi les virus apparentés à cette famille a été réalisée par alignement de
séquences disponibles dans les banques de données. Des réactifs homologues ont également
été préparés, d'une part, par immunisation d'animaux de laboratoire avec des broyats totaux de
larves de C. gigas vi rosées, d'autre part par clonage de l'ADN total extrait d'huîtres virosées.
Enfin, la mise au point d'un protocole reproductible permettant la purification du virus
à partir de larves de C. gigas infectées, a permis de préparer des quantités de virions purifiés
nécessaires à l'immunisation d'animaux de laboratoire et l'obtention d'anticorps polyclonaux
spécifiques. De plus, l'extraction d'acides nucléiques à partir de particules virales purifiées a
permis d'une part de préciser la nature du génome de ce virus et d'autre part de cloner des
fragments de génome. Ces réactifs ont été utilisés dans des essais préliminaires de mise au
point de méthodes de diagnostic respectivement en immunohistochimie et en dot blot.
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