Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

Ces électrophorèses ont également permis de montrer l'apparition de protéines
nouvelles dans les cellules BF2 virosées. Sept de ces protéines ont pu être visualisées après
coloration des gels à l'argent: P4, PlI, Pl3, P19, P24, P38 et P53. De la même façon, si les
échantillons de dorade et de flet sont comparés aux cellules saines, respectivement onze et six
protéines sont spécifiques des échantillons de virus. Toutefois, le choix du témoin sain est
relativement aléatoire et ne peut pas être pris en compte pour établir la spécificité des
protéines provenant des kystes de poissons. Ce témoin a néanmoins été choisi, ne pouvant
disposer de tissus sains de dorade royale et de flet à ce moment. Parmi les protéines
apparemment spécifiques des échantillons vi rosés, il faut noter que deux sont communes aux
trois virus: 166,9 kda (Pli, DlI et F9) et 152,3 kda (Pl3, DI2 et FIO) et une autre protéine
est conservée pour les virus de dorade et de flet: 51,4 kda (D33 et F25).
Il faut noter de plus que les profils protéiques réalisés à partir de virus purifiés
(Tableau 1, chapitre 1) peuvent être superposés à ces profils établis à partir de tissus virosés
totaux.
1.2 - Comparaison antigénique
L'analyse d'extraits protéiques de différents tissus de poissons vi rosés en gel SDS­
PAGE ayant révélé une bonne conservation des échantillons ainsi qu'une solubilisation
efficace des protéines, des essais ultérieurs de caractérisation antigénique ont été réalisés.
Dans un premier temps, la réactivité des anticorps monoclonaux et polyclonaux
spécifiques du LDV de perche (Le Deuff et al., 1995) a été testée en immunofluorescence, en
parallèle sur des frottis de kystes de flet et de dorade et sur des cellules BF2 saines et vi rosées.
Tous ces échantillons ont été fixés par une solution de formaldéhyde 3%. Des réactions
croisées, plus ou moins intenses, ont ainsi pu être mises en évidence pour les anticorps
polyclonaux et pour certains anticorps monoclonaux (Tableau 2). Les épitopes reconnus par
ces dix anticorps monoclonaux semblent être relativement bien conservés pour les trois isolats
de LDV testés puisqu'une réaction sur les frottis de kystes de flet est observée pour sept
d'entre eux, et huit anticorps montrent une réactivité contre les frottis de kystes de dorade.
La comparaison des résultats obtenus sur les coupes de tissus de dorades virosées et les
frottis de kystes de même provenance révèle des différences quant à la réactivité des
anticorps. En effet, la méthode de fixation utilisée diffère dans ces deux cas, les coupes
histologiques étant fixées par le liquide de Bouin et les frottis par le formaldéhyde 3%. Ces
différences peuvent être interprétées par la conservation des antigènes qui dépend du fixateur
utilisé. Le choix de la méthode de fixation devant donc dépendre des caractéristiques de
l'antigène cible qui est recherché (Eskelinen et al., 1992).
La conservation des épitopes reconnus par les anticorps peut varier en fonction de la
méthode de préparation des échantillons. Outre la fixation, différents facteurs tels que la
méthode de solubilisation des échantillons ou de dénaturation et de dissociation des peptides
peuvent intervenir dans la conservation des épitopes. En dehors du mode de préparation des
échantillons, chaque anticorps possède des propriété intrinsèques qui déterminent une
réactivité variable selon la technique utilisée (Catty, 1989) Ces observations conduisent, lors
de la mise au point d'une méthode de diagnostic, à tester différentes techniques de façon à
caractériser non seulement les antigènes cibles, mais aussi les propriétés des anticorps utilisés.
Pour ces raisons, les anticorps monoclonaux et polyclonaux spécifiques du LDV de
perche ont été testés ultérieurement en double diffusion et en western blotting.
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