Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

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CHAPITRE 2 Essais de reproduction expérimentale de mortalités chez Crassostrea gigas et Ostrea edulis
Chapitre Il : Essais de reproduction expérimentale de mortalités chez Crassostrea gigas et Ostrea edulis Publication 5 : Experimental transmission of herpes-Iike virus to axenic larvae of Pacific oyster, Crassos/rea gigas. Bulletin of the European Association of Fish Pathologists La reproduction expérimentale de l'infection chez l'huître creuse, Crassostrea gigas, a de multiples intérêts. D'un point de vue pathologique, il est en effet important de démontrer le pouvoir pathogène effectif de ce virus pour les larves et le naissain de C. gigas, afin de répondre ainsi au postulat de Koch. Cette démonstration nécessite non seulement de pouvoir reproduire l'infection virale, mais aussi de l'associer à des symptômes de mortalité tels que ceux observés lors des cas d'infections naturelles. De plus, en l'absence de système permettant la propagation du virus in vitro, la reproduction expérimentale de l'infection in vivo pourrait permettre de s'affranchir de l'approvisionnement en animaux vi rosés provenant d'infections naturelles, et ainsi d'assurer la pérennité de l'étude du virus. Enfin, l'obtention d'animaux virosés infectés expérimentalement pourrait permettre d'obtenir des taux d'infection beaucoup plus importants que ceux observés dans le cas d'infections naturelles. Ceci présenterait un intérêt tout particulier dans le cadre des essais de purification de particules virales. 1 - Essais d'infection expérimentale de larves axéniques de Crassostrea gigas Des essais d'infection expérimentale ont été entrepris, afin de déterminer si le virus apparenté aux herpès détecté en microscopie électronique à transmission sur des larves d'huître creuse, C. gigas, pouvait être l'agent causal des épisodes de mortalités observés en écloserie. Dans ce but, des larves axéniques ont été mises en élevage. Elles sont obtenues après ouverture et décontamination des géniteurs par une solution de Bétadine, prélèvement des gamètes en conditions stériles et fécondation in vitro en eau de mer filtrée (0,22 J.lm) et autoclavée. Les essais d'infection expérimentale consistent à inoculer les récipients d'élevage contenant des larves axéniques âgées de 48 heures, avec des broyats d'animaux virosés. Les broyats sont réalisés à partir de sujets infectés frais ou conservés au congélateur à -20°C. Ils sont ensuite clarifiés par centrifugation et ultrafiltrés sur membrane stérile de porosité 0,22 J.lm, afin d'éliminer tous les agents pathogènes autres que les virus, tout particulièrement les bactéries. Après inoculation, des broyats de larves virosées, les animaux sont observés quotidiennement. L'état des larves ainsi que les mortalités sont consignés. Ainsi, dans les récipients ayant reçu des broyats d'animaux vi rosés, il apparaît que dès le deuxième jour post inoculation, l'ensemble des larves sédimente au fond des flacons et présente des lésions au niveau du vélum (Publication 5 : Figure 1). Cependant au deuxième jour suivant l'inoculation, tous les animaux ayant sédimenté ne sont pas morts. Les résultats sont identiques pour les larves axéniques infectées par un broyat ultrafiltré réalisé à partir d'animaux vi rosés frais et 86
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