Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

Chapitre Il : Essais de reproduction expérimentale de mortalités
chez Crassostrea gigas et Ostrea edulis
Publication 5 : Experimental transmission of herpes-Iike virus to axenic larvae of Pacific
oyster, Crassos/rea gigas.
Bulletin of the European Association of Fish Pathologists
La reproduction expérimentale de l'infection chez l'huître creuse, Crassostrea gigas, a
de multiples intérêts. D'un point de vue pathologique, il est en effet important de démontrer le
pouvoir pathogène effectif de ce virus pour les larves et le naissain de C. gigas, afin de
répondre ainsi au postulat de Koch. Cette démonstration nécessite non seulement de pouvoir
reproduire l'infection virale, mais aussi de l'associer à des symptômes de mortalité tels que
ceux observés lors des cas d'infections naturelles.
De plus, en l'absence de système permettant la propagation du virus in vitro, la
reproduction expérimentale de l'infection in vivo pourrait permettre de s'affranchir de
l'approvisionnement en animaux vi rosés provenant d'infections naturelles, et ainsi d'assurer
la pérennité de l'étude du virus.
Enfin, l'obtention d'animaux virosés infectés expérimentalement pourrait permettre
d'obtenir des taux d'infection beaucoup plus importants que ceux observés dans le cas
d'infections naturelles. Ceci présenterait un intérêt tout particulier dans le cadre des essais de
purification de particules virales.
1 - Essais d'infection expérimentale de larves axéniques de Crassostrea gigas
Des essais d'infection expérimentale ont été entrepris, afin de déterminer si le virus
apparenté aux herpès détecté en microscopie électronique à transmission sur des larves
d'huître creuse, C. gigas, pouvait être l'agent causal des épisodes de mortalités observés en
écloserie.
Dans ce but, des larves axéniques ont été mises en élevage. Elles sont obtenues après
ouverture et décontamination des géniteurs par une solution de Bétadine, prélèvement des
gamètes en conditions stériles et fécondation in vitro en eau de mer filtrée (0,22 J.lm) et
autoclavée.
Les essais d'infection expérimentale consistent à inoculer les récipients d'élevage
contenant des larves axéniques âgées de 48 heures, avec des broyats d'animaux virosés. Les
broyats sont réalisés à partir de sujets infectés frais ou conservés au congélateur à -20°C. Ils
sont ensuite clarifiés par centrifugation et ultrafiltrés sur membrane stérile de porosité 0,22
J.lm, afin d'éliminer tous les agents pathogènes autres que les virus, tout particulièrement les
bactéries.
Après inoculation, des broyats de larves virosées, les animaux sont observés
quotidiennement. L'état des larves ainsi que les mortalités sont consignés. Ainsi, dans les
récipients ayant reçu des broyats d'animaux vi rosés, il apparaît que dès le deuxième jour post
inoculation, l'ensemble des larves sédimente au fond des flacons et présente des lésions au
niveau du vélum (Publication 5 : Figure 1). Cependant au deuxième jour suivant l'inoculation,
tous les animaux ayant sédimenté ne sont pas morts. Les résultats sont identiques pour les
larves axéniques infectées par un broyat ultrafiltré réalisé à partir d'animaux vi rosés frais et
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