Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

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La capacité des anticorps monoclonaux et polyclonaux à précipiter les antigènes viraux
sous forme dénaturée a été testée en double diffusion (Annexe 2). Cette méthode, relativement
simple et rapide à exécuter, ne nécessite en outre aucun équipement spécialisé. Ceci permet de
considérer cette méthode comme un bon candidat pour mettre en oeuvre un diagnostic de
routine. Le résultat n'est cependant obtenu qu'après 24 à 48 heures d'incubation. Seuls, les
anticorps polyclonaux et l'anticorps monoclonal N°5 ont donné lieu à la formation d'un arc de
précipitation après diffusion en gel d'agarose (Figure 2). La visualisation de ces arcs de
précipitation nécessite dans ce cas, de déposer une solution de protéines concentrée (10
Ilg/Ill). Néanmoins, aucun arc de précipitation ne peut être observé dans les mêmes conditions
lorsque les anticorps sont testés contre des échantillons de cellules BF2 saines.
Les essais de western blotting n'ont été réalisés qu'à partir d'échantillons de cellules
BF2 virosées et de kystes de dorades, l'objectif de ce travail étant de déterminer plus
précisément la nature des protéines cibles des anticorps.
Les dix anticorps monoclonaux et les anticorps polyclonaux donnent tous lieu à un
marquage en western blotting (Figure 3), montrant la conservation des épitopes reconnus
après dissociation des multimères par le p-mercaptoéthanol et dénaturation des protéines par
le SDS.
Une même protéine est reconnue par les dix anticorps monoclonaux, ce qui suggère
que cette protéine est très immunogène ou majoritaire. Elle pourrait alors constituer une bonne
cible pour réaliser un diagnostic antigénique. elle pourrait de plus être utilisée pour préparer
de nouveaux réactifs, par exemple, en immunisant des animaux de laboratoire contre cette
protéine purifiée. Par ailleurs, cette protéine semble être une glycoprotéine puisque certains
anticorps monoclonaux, les N°l, 2, 5 et 7, permettent de révéler plusieurs bandes (Figure 3).
En effet, un anticorps monoclonal spécifique d'un déterminant antigénique de nature
glycosylée, peut présenter une réactivité vis-à-vis de protéines différentes, présentant le même
résidu glycosylé.
L'ensemble de ces résultats met en exergue la complémentarité entre les différentes
techniques immunologiques. En particulier, concernant les échantillons de dorade, les
résultats d'immunofluorescence indirecte sur coupes et frottis ont donné un résultat positif
pour respectivement 8 et 9 anticorps monoclonaux, alors que la méthode de double diffusion
ne permet d'observer une réaction que pour un seul anticorps monoclonal, enfin, les dix
anticorps monoclonaux se sont avérés reconnaître des protéines virales par la méthode de
western blotting.
Les anticorps polyclonaux ont également été testés en western blotting (résultat non
montré). Sur des échantillons préparés à partir de kystes de dorade, ces réactifs ont présenté
une réactivité vis-à-vis d'au moins six protéines de poids moléculaires différents: 200, 165,
153, 100, 92, 62 et 56 kda. Les anticorps polyclonaux ont pour caractéristique de reconnaître
spécifiquement plusieurs déterminants antigéniques, contrairement aux anticorps
monoclonaux qui n'en reconnaissent qu'un. La multiplicité des spécificités rencontrées pour
ces réactifs permet d'envisager avec plus de certitude le diagnostic d'autres virus apparentés.
aux Lymphocyslivirus. De tels réactifs immunologiques peuvent être utilisés pour la recherche
et la caractérisation de structures antigéniques conservées, communes à différents
Lymphocyslivirus de poissons, et éventuellement de mollusques.
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