Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

Chapitre Il : Comparaison antigénique de différents isolats de virus
apparentés aux Lymphocystis chez les poissons et les mollusques
bivalves
Ce chapitre est basé sur la comparaison antigénique de différents isolats de virus
apparentés aux Lymphocystis. Ces essais ont été réalisés à l'aide des anticorps monoclonaux et
polyclonaux spécifiques du LDV isolé de perche (Le Deuff et al., 1995). Ces réactifs ont
permis de comparer par différentes méthodes immunologiques (immunofluorescence, double
diffusion et western blotting), trois isolats de LDV : LDV souche Leetown NFH isolé de
perche, Micropterus salmoides, kystes de LDV de dorade, Sparus aurata et kystes de LDV de
flet, Platichtys j/esus. Ces derniers, provenant de poissons capturés en rivière Elbe
(Allemagne), ont été gracieusement foumis par le Dr K. Anders (Université d'Heidelberg,
Allemagne).
Des échantillons d'huîtres portugaises, Crassostrea angulata, fixées en 1970, ont été
gracieusement donnés par le Dr M. Comps (IFREMER, Palavas-Les-Flots, France). Ces
pièces proviennent de glandes digestives infectées par un virus apparenté aux Iridoviridae,
associé aux mortalités massives d'huîtres portugaises en France, dans les années 70.
1 - Comparaison antigénique de différents isolats de Lymphocystis Disease
Virus de poissons
1.1 - Séparation électrophorétique des protéines
Les profils électrophorétiques en SDS-PAGE (4-17,5%) de différents isolats de LDV
ont été réalisés dans une première étape de cette caractérisation, afin de déterminer l'existence
d'éventuelles protéines conservées mais aussi de contrôler la qualité des échantillons, en
particulier la conservation des protéines et la solubilisation des échantillons dans le tampon de
lyse. Les électrophorèses ont ici été réalisées à partir d'échantillons non purifiés mais très
riches en particules virales. Les isolats de LDV disponibles provenaient de kystes de flet et de
dorade royale. Un autre LDV isolé à partir de perche et propagé sur des cellules de poisson
BF2 en culture a été utilisé. Ces profils ont été établis en parallèle avec celui des cellules BF2
saines.
Les profils obtenus à partir des kystes de dorades et de flet comportent respectivement
42 et 32 bandes, celui des cellules BF2 virosées 35, et le plus riche est celui des cellules BF2
saines, qui présente 63 bandes visibles après coloration du gel au nitrate d'argent (Figures 1 et
Tableau 1).
Parmi les 63 protéines pouvant être visualisées dans les échantillons de cellules BF2
saines, huit disparaissent lorsque ces mêmes cellules sont infectées par le LDV. Cette
observation confirme in vitro, les résultats obtenus in vivo par Flügel et al. (1982), qui
montrent que le LDV induit une "mise en veilleuse" (shutt off) de certaines synthèses
cellulaires, se traduisant notamment par la disparition de protéines sur les profils
électrophorétiques de tissus vi rosés comparés aux profils des mêmes tissus sains. De plus,
l'arrêt de ces synthèses s'effectue de façon très précoce au cours du cycle viral, avant même
que les synthèses virales ne soient facilement détectables.
52